Автор работы: Пользователь скрыл имя, 19 Февраля 2012 в 03:47, реферат
Необходимость проведения такого исследования, с одной стороны, вызвана тем, что нередко обстоятельства происшествия позволяют предположить принадлежность крови на вещественных доказательствах не только человеку, но и животному, а с другой определением групповой принадлежности следов, которое нельзя проводить без предварительного установления их видовой принадлежности.
1.Введение ………………………………………………………………..………3
2.Основная часть………………………………………………………………….5
3.Заключение…………………………………………………………………….14
4.Список литературы……………………………………………………………15
3.
Все моющие средства оказывали
неблагоприятное влияние на
4.
В тех случаях, когда ткань
после застирования
Л.О. Барсегян и соавт. предложили использовать лазерный индикатор иммунных реакций – ИРЛ-110. Работа лазера основана на распознавании комплекса антиген-антитело. Кинетический метод основывается на одномоментном введении антигена и антитела, метод сравнения – на трехэтапном введение – вначале антигена, затем антитела, затем комплекс-антиген – антитело. Введению комплекса предшествует 30-минутная экспозиция. Все вводимые ингредиенты следует тщательно очистить от посторонних примесей. Они не должны содержать средне-крупнодисперсных включений. Очищение достигается центрифугированием либо фильтрованием объектов перед введением их в реакцию.
Реакция преципитации в твердой среде. При работе с мутными вытяжками. Когда не центрифугирование, ни фильтрование не позволяет устранить замутнение, целесообразно реакцию преципитации осуществлять в агаре. Впервые реакция была предложена O.Ouchterlony (1949). Принцип ее заключается в следующем. В агаре в две лунки помещается антиген и антитело. Ингредиенты диффундируют друг к другу и в месте контакта образуется полоса преципитации. Преципитация в агаре может быть проведена на предметных стеклах, в чашках Петри, на стеклянных пластинах. Рабочим разведением является 1% раствор агара. Специальным металлическим пробойником в агаре проделываются отверстия. Отверстия могут располагаться различно- их может быть три, пять, шесть. Расстояние между центральным отверстием и отверстиями, расположенными по периферии, составляет 3-5мм.
Перед проведением реакции проверяют титр и специфичность сывороток.
Электрофоретические методы определения
Видовой принадлежности объектов.
В
настоящее время для
Электропреципитация сочетает в себе преимущества реакции преципитации в геле с чувствительностью, превосходящей реакцию в жидкой среде; метод обеспечивает проведение реакции в более сжатые сроки и используется для установления:
1.видовой
принадлежности крови на
2.видовой принадлежности мышц:
3.видовой принадлежности костей:
4.при исследование мутных вытяжек;
5.
при плохой растворимости
6. при неспецифических явлениях в реакции кольцепреципитации.
Впервые метод был предложен в 1959 г. A.Bossardom.
Принцип метода. При электрофорезе в агаре перемещения белков под воздействием электрического поля определяется двумя силами: зарядом белка и величиной элетроосмотического потока жидкости внутри носителя.
Агаровый слой представляет собой сеть капилляров (губку), стенки которой при pH7-9 заряжено отрицательно. В жидкости в близи стенок агаровой трубки скапливаются положительно заряженные ионы в следствие чего практически вся жидкость в агаре заряжена положительно по отношению к твердой фазе. При наложении электрического поля положительные ионы передвигаются к катоду, увлекая за собой и жидкую фазу. Возникает электроэндоосмотический поток, т.е. передвижение жидкости в пористой среде под влиянием электрического поля.
В 1% агаровом геле, приготовленном на барбиталовом буфере с pH 8,6, наступает разделение белков в двух направлениях. Антитела, являясь глобулинами, перемещаются от анода к катоду. Это обусловлено как положительным зарядом антител, так, и явлением электроэндоосмоса. Большинство антигенов заряжены отрицательно, в результате чего движутся к аноду. Явление электроэндоосмоса, имеющего противоположное направление, не отражается на направлении движения антител, хотя несколько замедляет их скорость.
При одновременном внесении и соответствующем расположении в геле антител и антигенов они движутся на встречу друг другу, а гомологичные, вступают в реакцию между собой, образуют при этом преципитат в виде полос белого цвета.
Метод встречного электрофореза на ацитат-целлюлозной пленке. Практически только этим методом в силу его высокой чувствительности возможно установить видовую принадлежность мочи, а также вид белка в подвергавшихся тщательному уничтожению следах крови.
В основе встречного электрофореза на ацетатной пленке лежит образование специфических не растворимых преципитатов в результате миграции антигенов на встречу друг другу под воздействием электрического поля.
Электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы имеет ряд преимуществ по сравнению с другими носителями (агаром, полиакрилом и др.). К ним относится следующее:
-ацетат
– целлюлозная пленка всегда
готова к использованию,
-пленка
отличается однородностью
- для
исследования на ацитат-
-результаты
исследования можно хранить (
Для проведения этого исследования необходим аппарат «ЭПАУ-20» , пленки из ацитатцелюлозы, электродный буферный раствор, раствор для окрашивания.
Ацетатцеллюлозную
пленку в течение 2-3 мин. Смачивают
электродным буферным раствором, отжимают
между двумя листами
Большой набор методов позволяет экспертам исследовать практически любые следы, содержащие кровь, и в частности, замытые и старые пятна. В то же время нельзя обойти молчанием такую известную истину – высокая чувствительность может отрицательно сказаться на специфичности реакции. Учитывая, что эксперты чаще всего имеют дело со значительно загрязненными предметами, этот факт необходимо принимать во внимание во избежание получения ложноположительного результата.
В свете сказанного значительный интерес представляет т.н. OBTI – тест (набор для иммунохроматографического одноэтапного определения скрытой крови в кале).
Набор обти-тест представляет собой продолговатую пластину с двумя небольшими углублениями округлой и продолговатой форм. Пластинка содержит нитроцеллюлозную мембрану, на которую нанесены мышиные монокланальные антитела против гемоглобина человека и антигены козы против Ig G мыши. Внутри упаковки помещена специальная таблетка-осушитель, препятствующая увлажнению мембраны. В набор помимо описанной и герметически упакованной мембраны входит специальный флакончик с трисбуфером и аппликатор для экстрагирования исследуемого материала.
Набор пригоден в течении длительного времени, его следует хранить при температуре +2-30*С, нельзя замораживать, перегревать.
Ход реакции – изучаемый материал в пробирках заливался двумя каплями прилагаемого к набору экстракта и оставался для экстрагирования на несколько часов. Обе капли вносили в округлое образование на пластинке и в течение 2-3 минут учитывали результаты. Если на мембране появлялась одна четкая полоса, то это свидетельствовало о правильности проведенной реакции и об отсутствии в изучаемом материале крови человека. если на мембране образовывались две параллельные синие полоски, то из этого следовало, что в материале есть кровь человека. Для решения вопроса об отсутствии крови время наблюдения следует продлевать до 10 мин., так как в ряде случаев при значительном разведении крови (1:15000) вторая полоса проявлялась к 10 минутам наблюдения.
Тест специфичен и не дает положительной реакции с кровью различных животных. Высокая чувствительность теста позволяет эффективно исследовать замытые следы крови и следы ее значительной давности.
Следует
иметь в виду возможность получения
отрицательного результата теста при
наличии крови животного
Обти-тест
позволяет установить одномоментно
наличие и вид крови человека.
Однако, в связи с относительной
дороговизной наборов обти-теста
широкое применение его ограничено.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В
заключение ко всему вышеизложенному,
следует отметить, что в арсенале
судебных медиков в настоящее
время имеется достаточное
СПИСОК
ЛИТЕРАТУРЫ
“Методика и техника судебно-медицинской экспертизы вещественных доказательств”.
Москва
– 1963 год, 277стр.
“Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств”
Москва-1989
год, 295стр.
“Судебно-медицинское исследование вещественных доказательств”
Москва-1961
год, 295стр.
Москва-2003 год, 13стр.