Подготовка пациентов к лабораторным исследованиям. Техника проведения

3.  Стерильная пробирка Vacutainer – существуют пробирки различного объема с точной концентрацией наполнителей; антикоагулянты – цитрат натрия (синие крышки для забора на коалуграмму) (цитрата 0.5 мл), соли гепарина, калийные соли ЭДТА (пробирки с сиреневыми крышками для забора крови на ОАК): ингибиторы гликолиза – фторид натрия, йодоацетат лития (контейнеры для забора капиллярной крови на ОАК); ингибиторы тромбоцитарного фактора 4 для исследования коагуляции – ЦТАД-раствор; АЦД-раствор для определения групп крови 

 

Антикоагулянт

Антикоагулянты требуются в большинстве гематологических исследований. Не последнюю роль играет выбор антикоагулянта. Наиболее часто используют К2ЭДТА или К3ЭДТА (дву- или трикалиевый этилендиаминтетраацетат или трилон Б), тринатрий-цитрат и гепарин. Первые два вещества ингибируют коагуляцию, связывая кальций крови; гепарин действует в качестве Ко-фактора образования комплекса тромбина с антитромбином III плазмы, в результате тромбин связывается и не переводит фибриноген в фибрин, кровь не свертывается.

ЭДТА - предпочтительный антикоагулянт при подсчете форменных элементов крови с использованием автоматических гематологических анализаторов. Концентрация ЭДТА во взятой крови должна быть постоянной и составлять 1,5 - 2,2 мг/мл крови (например, для получения соотношения 1,5 мг/мл в пробирку, рассчитанную на 2 мл крови, наливают 0,04 мл 7,5% раствора К, ЭДТА или К3ЭДТА). Недостаток антикоагулянта приводит к микросвертыванию крови и образованию сгустка, избыток - является причиной роста осмотического давления крови и сморщивания клеток. Изменение концентрации антикоагулянта от измерения к измерению могут вызвать неконтролируемые отклонения исследуемых параметров крови связанных, прежде всего, с объемом эритроцитов и тромбоцитов. У некоторых пациентов может наблюдаться небольшая спонтанная агрегация тромбоцитов или реже, так называемая ЭДТА-зависимая псевдотромбоцитопепия (иммунного характера). Использование Na, ЭДТА не рекомендуется вследствие его плохой растворимости в крови.

Гепарин - лучший антикоагулянт для определения осмотической резистентности эритроцитов и функциональных исследований лейкоцитов, включая ряд тестов с иммунологическими маркерами. Особенностью действия этого антикоагулянта является способность максимально предотвращать гемолиз. Мазки, приготовленные из гепаринизированной крови и окрашенные по Романовскому, имеют голубоватый фон.

Цитрат натрия - антикоагулянт выбора при исследованиях свертывающей системы крови и функции тромбоцитов. Применение в качестве антикоагулянтов гепарина или цитрата натрия сопровождается изменениями в структуре клеток и поэтому не рекомендуется для исследования морфологии клеток крови, кроме того, гепарин не предотвращает агрегацию клеток, поэтому его нецелесообразно использовать при подсчете лейкоцитов и тромбоцитов.

Несоответствие концентрации антикоагулянта объему взятой крови а также недостаточно тщательное смешивание может привести к значительным ошибкам, в том числе повлечь за собой неточное определение концентрации клеточных элементов, искажение морфологической структуры клеток. 

 

Осложнения при взятии крови: 

 

·  Ранние осложнения: гематома и коллапс (обморок).

·  Избежать гематомы можно созданием в месте прокола адекватного давления, наложив тугую повязку.

·  В случае обморока пациента необходимо уложить па кушетку, дать понюхать раствор нашатырного спирта и вызвать врача.

·  Поздние локальные осложнения: тромбоз вены, иногда может развиться тромбофлебит.

·  Поздние общие осложнения: заражение вирусами гепатитов В и С, вирусом иммунодефицита человека через инфицированную иглу или шприц. 

 

Профилактика осложнений: 

 

— если кровотечение из места прокола трудно остановить, этому участку тела придают возвышенное положение и накладывают давящую повязку. Пациента наблюдают до тех пор, пока кровотечение не прекратится;

— кровь для любых лабораторных исследований не рекомендуется брать из той конечности, в которую переливают кровь;

— у больных лейкозами, агранулоцитозом и пациентов с пониженной сопротивляемостью организма (иммунодефициты) прокол пальца или мочки уха может вызвать инфекцию скорее, чем венепункция. Если для исследования все же требуется капиллярная кровь, кожу необходимо особенно тщательно обрабатывать дезинфицирующим агентом. Этиловый спирт не является средством выбора, лучше использовать специальные антисептические растворы. 

 

Доставка, хранение и подготовка проб к исследованию

Исследование крови необходимо проводить либо непосредственно после взятия (исключается возможность спонтанной агрегации тромбоцитов), либо спустя 25 - 240 мин (время, необходимое для адаптации тромбоцитов к антикоагулянту).

Сразу после взятия и непосредственно перед исследованием кровь должна быть тщательно перемешана вручную в течение нескольких минут для разведения антикоагулянта и равномерного распределения форменных элементов в плазме. Длительное постоянное перемешивание образцов до момента их исследований не рекомендуется вследствие возможного травмирования и распада патологических клеток.

При необходимости проведения отсроченного анализа (транспортировка на отдаленные расстояния, техническая неполадка прибора и т. д.), пробы крови хранят в холодильнике (4° - 8°С) и исследуют в течение 24 часов. Кровь нельзя замораживать. При длительном хранении происходит набухание клеток и изменение параметров, связанных с их объемом. У практически здоровых людей эти изменения не носят критического характера и не сказываются на количественных параметрах. Однако при наличии патологических клеток, последние могут изменяться или даже разрушаться вследствие апоптоза в течение нескольких часов с момента взятия крови.

Исследование крови на приборе проводится при комнатной температуре. Кровь, хранившуюся в холодильнике, необходимо согреть до комнатной температуры, так как при низкой температуре увеличивается вязкость крови, и форменные элементы имеют тенденцию к склеиванию, что в свою очередь, приводит к нарушению перемешивания и неполному лизису. Исследование холодной крови может быть причиной флагирования при трехчленной дифференцировке лейкоцитов вследствие сжатия лейкоцитарной гистограммы.

При выполнении гематологических исследований на значительном удалении от места взятия крови неизбежно возникают проблемы, связанные с неблагоприятными условиями транспортировки. Воздействие механических факторов (тряска, вибрация, перемешивание и т.д.), нарушения температурного режима, вероятность пролива и загрязнения проб могут оказывать влияние на качество анализов. Для устранения этих причин при перевозках пробирок с кровью рекомендуется использовать герметично закрытые пластиковые пробирки и специальные транспортные изотермические контейнеры.

Ликвор

Показания к проведению исследования: подозрение на нейроинфекцию. При подозрении на гнойный менингит в обязательном порядке в лабораторию направляют:

1.         Ликвор для первичного посева, бактериоскопии и серологических исследований в количестве не менее 1,0 мл.

2.         Ликвор в 0,1% полужидком агаре (среда «обогащения»).

3.         «Толстая капля» крови для бактериоскопии.

4.         Кровь в жидкой питательной среде или в 0,1% полужидком агаре (среда обогащения) для бактериологического накопления культуры: 5,0 мл крови засевают в 50,0 мл среды обогащения.

5.         Кровь в количестве не менее 2-х мл для серологических исследований (РПГА, ВИЭФ, ЛА и др.).

Необходимое оснащение:

1.         Игла для люмбальной пункции.

2.         Мандрены.

3.         Анестетик.

4.         70° этиловый спирт.

5.         2% или 5% настойка йода или другой антисептик, разрешенный к применению.

6.         Перевязочный материал.

7.         Стерильные пластиковые пробирки, лучше центрифужные с завинчивающимися крышками.

8.         Шоколадный агар (желательно).

9.         0,1% полужидкий агар.

Взятие исследуемого материала:

Ликвор получают путем люмбальной пункции. Желательно взять материал сразу при поступлении больного в стационар, до начала лечения.

Пункция и взятие материала проводятся с соблюдением всех правил асептики, персонал работает в масках.

•Больной укладывается в положение на боку, головной конец кровати максимально опущен, голова прижата к груди, ноги — к животу, спина максимально согнута.

Определяются необходимые для выбора места пункции анатомические ориентиры. Пункцию проводят между поясничными позвонками L3-L4, L4-L5 или пояснично-крестцовыми L5-S1.

Обрабатывают область пункции сначала раствором антисептика, а затем 70° спиртом.

•Пальпируют рукой в стерильных перчатках точку пункции и вводят раствор анестетика.

Проводят пункцию иглой со вставленным мандреном до ощущения «провала».

Извлекают мандрен.

•Первую порцию ликвора берут в отдельную пробирку для проведения общего ликворологического исследования. Вторую порцию, предназначенную для бактериологического исследования, собирают в стерильную центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой.

Согласно МУК 4.2.1887—04 ликвор после пункции распределяют следующим образом:

·          1,0 мл направляют в клиническую лабораторию для проведения общего ликворологического и цитологического исследования;

·          0,2 мл направляют для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР);

·          1,0 мл направляют для первичного бактериологического посева (если не сделан в отделении при пункции), бактериоскопии и серологических исследований; для бактериологического и бактериоскопического исследований отбирается либо вторая порция ликвора, либо самая мутная из всех. Ее отбирают в стерильную, желательно центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой;

·          0,5 мл засевают в чашку с «шоколадным» агаром непосредственно у постели больного. Далее чашку хранят в условиях термостата при 37°С до доставки в лабораторию;

·          0,5 мл засевают в 5,0 мл 0,1% полужидкого питательного агара непосредственно у постели больного и далее хранят при +37°С в условиях термостата до доставки в лабораторию;

Касаться руками краев канюли, иглы, пробирки, класть пробку — нельзя.

Доставлять материал в бактериологическую лабораторию лучше в термостатированной переноске (сумке) на грелке с водой + 37—38°С; в отсутствие возможности немедленно доставить материал в лабораторию, его лучше поместить в транспортную систему со средой Эймс (с углем или без него) и тогда его можно хранить в термостате до 48 часов. Доставка материала в транспортной системе должна производиться также с обеспечением мер поддержания температуры +37°С.

При необходимости проведения вирусологических исследований пробы ликвора в стерильной пластиковой пробирке помещают в холодильник при температуре +2...+8°С или замораживают.

При получении материала пункцией боковых желудочков мозга, ликвор из шприца, предварительно сняв иглу, вносят в стерильную пробирку над пламенем спиртовки, обжигают горлышко стеклянной пробирки и пробку в пламени спиртовки. 

 Отделяемое из верхних дыхательных путей

Посев материала из глотки, носа и ротовой полости только на 5% кровяной агар. Основным возбудителем бактериальных инфекций верхних дыхательных путей, включая скарлатину, тонзиллиты, фарингиты и пр. является Streptococus pyogenes.

Для выявления таких видов микроорганизмов, как менингококки, дифтерийная палочка, гемофильные бактерии, о необходимости которого врач должен проинформировать лабораторию, для посева будут использованы специальные питательные среды.

Диагностика некоторых специфических форм ангин осуществляется с помощью бактериоскопического исследования. Микроскопия мазков необходима при диагностике ангины Людвига (тяжелая гнилостно-некротическая флегмона полости рта полимикробной этиологии) и ангины Симановского-Плаута-Венсана (некротическая ангина, вызываемая симбиозом Fusobacterium DPP. и Treponema vincentii).

4.3.1 Мазок со слизистых передних отделов полости носа

Показания к проведению исследования: диагностика стафилококкового бактерионосительства.

Необходимое оснащение: стерильный зонд-тампон из вискозы на пластиковой оси в пластиковой пробирке (тубсер).

Взятие исследуемого материала:

Материал забирается одним сухим вискозным тампоном тубcера из двух носовых ходов, помещается обратно в стерильную сухую пластиковую пробирку и возможно быстро доставляется в лабораторию, так как должен быть засеян на питательные среды в течении. При отсутствии вышеупомянутых промышленно произведенных изделий для взятия материала можно использовать стерильный зонд-тампон в индивидуальной упаковке и стерильную емкость (пробирку) для его транспортировки в лабораторию (не более 2-х часов с момента взятия пробы). 

 

4.3.2 Соскоб со слизистых передних отделов полости носа

Показания к проведению исследования: озена, риносклерома.

Необходимое оснащение:

·          Стерильная пластиковая бактериологическая петля или стерильный зонд-тампон в пластиковой пробирке (тубсер); или транспортная система со средой Стюарт или Эймс.

·          Носовое или носоглоточное зеркало.

Взятие исследуемого материала:

В случае инфильтрационной формы риносклеромы материал берут с помощью стерильной пластиковой бактериологической петли и носового или носоглоточного зеркала прямо с инфильтрированной слизистой, слегка повреждая ее. У больных озеной или атрофической формой риносклеромы взятие материала проводят петлей либо стерильным зондом-тампоном, причем последнее предпочтительнее. При всех видах и формах клебсиеллезной инфекции одновременно следует осуществлять забор материала из обеих половин носа и глотки, а при локализации процесса в гортани, трахее и бронхах — методом кашлевых пластинок.

Материал доставляется в лабораторию в течение 2 часов.

 

4.3.3 Слизь из носоглотки и носа

Показания к проведению исследования: подозрение на дифтерию.

Необходимое оснащение:

1.Стерильные зонды-тампоны в сухой пластиковой пробирке (тубсеры) или сухие стерильные зонды-тампоны, вмонтированные в ватные или корковые пробки пробирок. Тампон должен иметь форму «капли», а не «веретена» и находясь в пробирке не касаться ее дна и стенок.