Контрольная работа по "Микробиологии"

     Биохимическая активность пастерелл незначительна: многие штаммы ферментируют с образованием кислот, без газа глюкозу, сахарозу, сорбит и манвит; лактозу и дульцит не изменяют; молоко не свертывают; МПЖ не разжижают; в бульоне, содержится пептон, образуют индол.

    Биопроба - белых мышей, кроликов. Кроликов  проверяют введением в течение 3 дней в каждое носовое отверстие двух капель 0,5%-ного водного раствора бриллиант-грюна. У пастереллоносителей появляется гнойное истечение из носовой полости, и при наличии вирулентных пастерелл животное погибает через 18—36 часов.

    Дифференциальная  диагностика. Пастереллез необходимо дифференцировать: у телят — от сибирской язвы, пироплазмидозов, эмфизематозного карбункула, стафилококковой и стрептококковой инфекций; сальмонеллеза, колибактериоза и респираторных вирусных инфекций; у поросят — от чумы, рожи, гемофилезной плевропневмонии и сальмонеллеза; у ягнят—от сибирской язвы, пироплазмидозов, клостридиозов и стрептококковой инфекции.

 

     Дифференциация  пастерелл, салмонелл и кишечной  палочки по биологическим свойствам.

     Лечение. В качестве специфического лечения используют гипериммунную противопастереллезную сыворотку. Лучший эффект получают при одновременном применении пастереллезной сыворотки с антибиотиками. Можно брать пенициллин, стрептомицин, дибиомицин, дитетрациклин, оримицин, биовитин-40 и биовит-80, окситетрациклин (террамицин), бициллин-5. Одновременно применяют сульфаниламидные препараты (норсульфазол, сульфазин, этазол, фталазол, сульфадимезин).

 

     Профилактика - полужидкая формолгидроокисьалюминиевая вакцина против пастереллеза КРС и буйволов; формолвакцина против пастереллеза овец, свиней; поливалентная формолвакцина против паратифа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят; масляная формолвакцина против пастереллеза КРС, буйволов и овец;  живая вакцина из инкапсулированных и неинкапсулированных культур Past. haemolytica, ассоциированные пастереллезно-борделлезные вакцины «Дессау» (Германия), «Солкоринителл» (Швейцария).

 

       Типизацию  проводят в РА и при помощи  стафилококкового теста (штамм № 7128) в чашках Петри с МПА. Установлена пригодность опсонофагоцитарной реакции для прижизненной диагностики пастереллеза. Опсонофагоцитарная способность сыворотки крови больных пастереллезом животных повышается уже в первые часы после инфицирования и остается на сравнительно высоком уровне в течение нескольких месяцев. Этой же реакцией можно устанавливать поствакцинальный иммунитет.

ВАКЦИНА ЭМУЛЬГИРОВАННАЯ  ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, БУЙВОЛОВ И ОВЕЦ

Суспензия белого цвета, иногда со светло-желтым оттенком, вязкой консистенции, непрозрачная; при длительном хранении допускается  незначительное отслоение на 0.5-1 см минерального масла под эмульсией; при тщательном встряхивании вакцина приобретает однородную гомогенную структуру.

 

Вакцина представляет собой инактивированную формалином концентрированную культуру пастерелл крупного рогатого скота, буйволов и овец, заключенную с помощью эмульгатора в водно-масляную эмульсию.

 

Расфасована по 50, 100 или 200 мл во флаконы по ТУ 64-2-10. Флаконы  герметично укупоривают резиновыми пробками по ТУ 38-006-108 и обкатывают алюминиевыми колпачками по ОСТ 64-009.

На каждом флаконе  должна быть этикетка с указанием  предприятия-изготовителя и его  товарного знака, наименования препарата, количества его во флаконе (мл) и  доз для животных, номера серии, номера контроля, срока годности, способа  применения, даты изготовления (месяц, год), условий хранения и обозначения ТУ (СТО).

 

Этикетированные флаконы  с вакциной обертывают бумагой или  алигнином ГОСТ12923, а в холодное время года серой ватой или  другими теплоизолирующими материалами  и упаковывают в коробки, обеспечивающие неподвижность флаконов с препаратами при транспортировании.

 

Маркировка, характеризующая  данные об упакованной продукции  должна содержать следующие данные: наименование организации-производителя, наименование биопрепарата, его количество в коробке, номер серии, номер контроля, дата изготовления, срок годности, условия хранения и обозначения ТУ (СТО) и надписи "Для животных". Внутрь каждой коробки вкладывают инструкцию по применению вакцины.

 

ФОРМОЛВАКЦИНА ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА ОВЕЦ И СВИНЕЙ

Вакцина против пастереллеза овец и свиней представляет собой преципитированную культуру пастерелл, обезвреженную формалином. По внешнему виду это прозрачная, соломенно-желтого цвета жидкость, с наличием на дне обильного осадка; последний при встряхивании разбивается в равномерную муть.

 

Вакцина пригодна для  применения в течение года со дня  изготовления при условии ее хранения в темном, сухом помещении при  температуре 2 - 15 °С. Вакцина замороженная к применению непригодна.

 

Флаконы с вакциной должны быть плотно укупорены резиновыми пробками и обкатаны металлическими колпачками. На этикетке или несмываемой краской на стекле каждого флакона должны быть обозначены наименование предприятия-изготовителя, товарный знак, название препарата, количество вакцины, номер серии и госконтроля, дата изготовления, дозировки и срок годности, способы применения, условия хранения, название технических условий.

 

Флаконы с вакциной, имеющие  трещины, не разбивающийся при встряхивании осадок, содержащие посторонние примеси (плесень, кусочки пробки и т.п.), без этикеток со всеми данными и с нарушением укупорки, а также остатки вакцины, не использованные в день открытия флаконов, бракуют. Вакцину уничтожают путем кипячения в течение часа.

 

Каждый флакон перед  применением тщательно встряхивают. В целях экономного расходования вакцины и исключения загрязнения флаконов во время вакцинации рекомендуется пользоваться краном Агали и элеватором. Шприцы, иглы, кран Агали и элеватор до и после вакцинации стерилизуют кипячением в течение 1 ч. Для каждого животного употребляют стерильную иглу.

 

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПТИЦ

Изобретение предназначено  для промышленного производства вакцин против пастереллеза птиц и  животных. Процесс выращивания пастерелл  проводят непрерывно-проточным хемостатным способом с непрерывной подачей в ферментер определенных количеств питательной среды и раствора глюкозы. При этом непрерывно осуществляют слив из аппарата такого же количества бактериальной суспензии. Слитая бактериальная суспензия используется на последующих стадиях изготовления вакцины. Изобретение позволит увеличить продуктивность процесса культивирования по выходу морфологически типичных и жизнеспособных пастерелл с учетом гибели клеток при хранении вакцины, а также повысить качество препарата и стандартности биологических свойств вакцины.

 Изобретение относится  к биотехнологии и может быть  использовано при промышленном  производстве вакцин против пастереллеза  сельскохозяйственных животных  и птиц.

Известен способ изготовления вакцины против пастереллеза птиц (Патент SU 1566533 А1 А 61 К 39/102).

Существующий способ изготовления вакцины против пастереллеза обладает рядом недостатков: процесс  культивирования ведется периодическим  способом, при котором свойства клеток и состав культуральной среды значительно изменяются в ходе выращивания и который обладает низкой производительностью из-за большого числа подготовительных и вспомогательных операций, что сказывается на качестве препарата, а также на эффективности производства.

При анализе патентной  документации и научно-технической  литературы нами не обнаружено достаточно эффективного способа изготовления вакцин против пастереллеза, приближающегося  к современному уровню производства биопрепаратов.

 

 Целью заявляемого  изобретения является увеличение продуктивности процесса культивирования по выходу морфологически типичных и жизнеспособных пастерелл с учетом гибели клеток при хранении вакцины, а также повышение качества препарата и стандартности биологических свойств вакцины.

 

 Поставленная цель  достигается за счет того, что  процесс выращивания пастерелл  проводят непрерывно-проточным хемостатным  способом, т.е. с непрерывной подачей  в ферментер определенных количеств  питательной среды и раствора  глюкозы, и также непрерывным  сливом из аппарата такого же количества бактериальной суспензии, которая используется на последующих стадиях изготовления вакцины.

 Способ осуществляется  следующим образом.

 В стерильный ферментер  загружают жидкую питательную  среду, изготовленную на основе  мясного гидролизата. Среду засевают культурой пастерелл (Pasteurella multocida штаммы Пастеровский, К, AB, А-8683, В-681, Д-Т-80), выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и культивируют периодическим способом в течение 3-4 часов. Затем включают проток стерильной питательной среды и раствора глюкозы таким образом, чтобы суммарный объем поступающих за 1 час в ферментер питательной среды и раствора глюкозы составлял 0,5-0,9 объема суспензии в аппарате, а концентрация глюкозы в поступающей питательной среде была в пределах 1-5 г/л. Устройство слива по уровню при этом поддерживает постоянный объем бактерийной суспензии в аппарате. В ферментере стабилизируют pH культуральной жидкости на уровне 7,8-8,2 ед. подачей раствора NaOH, а парциальное давление растворенного кислорода (pO2) на уровне 30-40% от насыщения кислородом воздуха - изменением расхода воздуха на аэрацию и скорости вращения мешалки. После установления в ферментере постоянной концентрации пастерелл бактерийную суспензию используют для изготовления вакцины. В указанных пределах изменения скорости разбавления, концентрации глюкозы в питательной среде, pH и pO2 рост пастерелл лимитируется источником углерода - глюкозой.

 Способ изготовления  вакцины против пастереллеза  птиц из шт. "K" с минимальными значениями параметров. Для культивирования пастерелл используют жидкую питательную среду на основе мясного гидролизата с pH 7,8 ед., в процессе выращивания поддерживают pO2 на уровне 30% от насыщения культуральной среды кислородом воздуха. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и культивируют в течение 3-4 часов при температуре (371)oC. Затем включают проток стерильной питательной среды и раствора глюкозы таким образом, чтобы их суммарный объем, поступающий в аппарат за 1 час составлял 0,5 от объема баксуспензии в ферментере, а концентрация глюкозы в поступающей среде была 1 г/л. После установления в аппарате постоянной концентрации пастерелл, баксуспензию используют для изготовления вакцины: Концентрация колониеобразующих пастерелл при этом составляет 22,4 млрд. /мл, культура имеет типичную морфологию (короткие грамотрицательные палочки), стабильную ультраструктурную организацию.

 

 Продуктивность по  выходу жизнеспособных пастерелл  хемостатного процесса культивирования составляет 11,2 млрд./млчас, экономический коэффициент - 18,0 млрд. микробных тел/мг глюкозы. Рост пастерелл лимитирован глюкозой. Вакцина, изготовленная из хемостатной культуры пастерелл безвредна, иммуногенность составляет 95%. Стабильность при хранении в течение 3 месяцев - 53%. Продуктивность с учетом гибели клеток при хранении - 5,9 млрд. микр. тел/млчас.

Способ изготовления вакцины против пастереллеза птиц из шт. "K" с оптимальными значениями параметров. Для культивирования  пастерелл используют жидкую питательную среду на основе мясного гидролизата с pH 8,0 ед., в процессе выращивания поддерживают pO2 на уровне 35% от насыщения культуральной среды кислородом воздуха. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и культивируют в течение 3-4 часов при температуре (371)oC. Затем включают проток стерильной питательной среды и раствора глюкозы таким образом, чтобы их суммарный объем, поступающий в аппарат за 1 час составлял 0,7 от объема баксуспензии в ферментере, а концентрация глюкозы в поступающей среде была 3 г/л. После установления в аппарате постоянной концентрации пастерелл, баксуспензию используют для изготовления вакцины. Концентрация колониеобразующих пастерелл при этом составляет 19,6 млрд. /мл, культура имеет типичную морфологию (короткие грамотрицательные палочки), стабильную ультраструктурную организацию. Продуктивность по выходу жизнеспособных пастерелл хемостатного процесса культивирования составляет 13,8 млрд./млчас, экономический коэффициент - 6,0 млрд. микробных тел/мг глюкозы. Рост пастерелл лимитирован глюкозой. Вакцина, изготовленная из хемостатной культуры пастерелл безвредна, иммуногенность составляет 100%. Стабильность при хранении в течение 3 месяцев - 51,2%. Продуктивность с учетом гибели клеток при хранении - 7,1 млрд. микр. тел/млчас.

 Способ изготовления  вакцины против пастереллеза  птиц из шт. "K" с максимальными  значениями параметров. Для культивирования  пастерелл используют жидкую  питательную среду на основе мясного гидролизата с pH 8,2 ед., в процессе выращивания поддерживают pO2 на уровне 40% от насыщения культуральной среды кислородом воздуха. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава, и культивируют в течение 3-4 часов при температуре (371)oC. Затем включают проток стерильной питательной среды и раствора глюкозы таким образом, чтобы их суммарный объем, поступающий в аппарат за 1 час составлял 0,9 от объема баксуспензии в ферментере, а концентрация глюкозы в поступающей среде была 5 г/л. После установления в аппарате постоянной концентрации пастерелл, баксуспензию используют для изготовления вакцины. Концентрация колониеобразующих пастерелл при этом составляет 14,8 млрд./мл, культура имеет типичную морфологию (короткие грамотрицательные палочки), стабильную ультраструктурную организацию. Продуктивность по выходу жизнеспособных пастерелл хемостатного процесса культивирования составляет 13,0 млрд./млчас, экономический коэффициент - 3,4 млрд. микробных тел/мг глюкозы. Рост пастерелл лимитирован глюкозой. Вакцина, изготовленная из хемостатной культуры пастерелл, безвредна, иммуногенность составляет 100%. Стабильность при хранении в течение 3 месяцев - 45%. Продуктивность с учетом гибели клеток при хранении - 5,85 млрд. микр. тел/млчас.