Контрольная работа по "Токсикологии"

В делительную воронку вносят 50 мл мочи, к которой по каплям прибавляют 10 % раствор серной кислоты до рН = 4...5 и 50 мл диэтилового эфира. Содержимое делительной воронки взбалтывают. После разделения фаз отделяют эфирную вытяжку.                                                                                  Водную фазу еще раз взбалтывают с 50мл диэтилового эфира.

Эфирные вытяжки соединяют и  выпаривают досуха. Сухой остаток  растворяют в 1 мл хлороформа. К хлороформному раствору прибавляют 2 капли свежеприготовленного 1 %-го раствора ацетата кобальта в метиловом спирте и несколько капель свежеприготовленного 1 % раствора гидроксида лития в метиловом спирте.                                                                                  После прибавления каждой капли указанных реактивов жидкость взбалтывают. Появление голубой окраски указывает на наличие барбитуратов в моче.

 

 

 

 

 

 

 

2.3.Химико-токсткологический  анализ фенобарбитала.  

Химико-токсикологический  анализ представляет собой совокупность научно обоснованных методов, применяемых  на практике для выделения, обнаружения  и количественного определения  токсических веществ.

Фенобарбитал (люминал) -5-фенил-5-этилбар-битуровая кислота — белый кристаллический порошок слабогорького вкуса, растворяется в этиловом спирте (1 : 15), хлороформе (1 : 50), в растворах щелочей, слабо растворяется в воде (1 : 1000).

Фенобарбитал экстрагируется органическими растворителями из кислых водных растворов.

Применение.                                                                                              Фенобарбитал оказывает снотворное, успокаивающее и противосудорожное действие. Он применяется для лечения эпилепсии, хореи и других заболеваний. В малых дозах фенобарбитал применяется при начальных стадиях гипертонической болезни, стенокардии и др. Фенобарбитал, по сравнению с другими барбитуратами, относительно медленно всасывается из пищевого канала и имеет продолжительное действие.

Метаболизм. Фенобарбитал метаболизируется несколькими путями. Основными метаболитами фенобарбитала являются 5-этил-5-п-гидроксифенилбарбитуровая кислота,п-оксифенилбарбитал. Эти метаболиты частично выделяются с мочой в виде глюкуронидов. Некоторое количество фенобарбитала превращается в о -оксифенобарбитал. Обнаружены еще 3 метаболита фенобарбитала, состав которых не изучен. Часть принятой дозы фенобарбитала выделяется с мочой в неизмененном виде.

Предварительная проба. 
Для обнаружения барбитуратов в моче применяют предварительную пробу, основанную на реакции этих веществ с ацетатом кобальта и гидроксидом лития. В делительную воронку вносят 50 мл мочи, к которой по каплям прибавляют 10 %-й раствор серной кислоты до рН = 4...5 и 50 мл диэтилового эфира. Содержимое делительной воронки взбалтывают.

 

После разделения фаз отделяют эфирную вытяжку. Водную фазу еще  раз взбалтывают с 50 мл диэтилового  эфира.  
Эфирные вытяжки соединяют и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл хлороформа. К хлороформному раствору прибавляют 2 капли свежеприготовленного 1 %-го раствора ацетата кобальта в метиловом спирте и несколько капель свежеприготовленного 1 %-го раствора гидроксида лития в метиловом спирте. После прибавления каждой капли указанных реактивов жидкость взбалтывают. Появление голубой окраски указывает на наличие барбитуратов в моче. 

Изолирование барбитуратов подщелоченной водой. 

Метод Валова.

В стакан или в коническую колбу вносят 100 г измельченного биологического материала, прибавляют 180 мл воды и 20 мл 10 %-гораствора гидроксида натрия. Содержимое стакана (или колбы) оставляют на 30 мин при частом перемешивании, а затем центрифугируют в течение 30 мин (3000 об/мин).                                                                                                      От осадка отделяют надосадочную жидкость (центрифугат), к которой прибавляют 120 мл 10 %-го раствора вольфрамата натрия и 1 н. раствор серной кислоты (до pH = 2). Жидкость нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин, а затем подвергают центрифугированию (30 мин). Центрифугат сливают с осадка и процеживают через ватный тампон, смоченный водой. Процеженную жидкость собирают в делительную воронку. Тампон промывают водой (10 мл).                                             Промывную воду тоже выливают в делительную воронку.                                    К процеженной жидкости прибавляют равный объем диэтилового эфира и взбалтывают в течение 15 мин. Эфирный слой отделяют и взбалтывают с 50 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия. Щелочной водный слой отделяют, подкисляют 25 %-м раствором серной кислоты до рН = 2 и взбалтывают с равным объемом диэтилового эфира.                                                     Полученную при этом эфирную вытяжку используют для обнаружения и количественного определения барбитуратов.

Обнаружение фенобарбитала. При взаимодействии фенобарбитала с изопропиламином и солями кобальта появляется фиолетовая окраска.

Для обнаружения барбитуратов Парри (1924) предложил реакцию, основанную на взаимодействии этих веществ с солями кобальта и аммиаком. В выпарительную чашку к сухому остатку (после удаления хлороформа) прибавляют 1 каплю свежеприготовленного реактива, состоящего из 1 мл 1% спиртового раствора кобальта нитрата и 1 мл 25% раствора аммиака. Избыток реактива стряхивают в сторону и наблюдают окрашивание сухого остатка. При наличии барбитуратов появляется розово–фиолетовое окрашивание.

 

 Фенобарбитал с солями кобальта и щелочью дает розовую или красную окраску.

Цвиккер (1931) установил, что от прибавления хлорида кобальта и гидроксида бария к барбитуратам образуется окрашенное соединение. В 1932 г. Цвиккер вместо гидроксида бария применил гидроксид калия. Другие исследователи вместо гидроксида бария применяли гидроксид лития. Исследуемое вещество или остаток, полученный после выпаривания вытяжек из соответствующих объектов, растворяют в 0,2—0,5 мл абсолютного этилового спирта. К этому раствору прибавляют 1—2 капли 1 %-го раствора ацетата кобальта в абсолютном этиловом спирте и 1—2 капли 1 %-го раствора гидроксида калия в абсолютном этиловом спирте. При наличии барбитуратов появляется розовая или красная окраска.

Выполнению этой реакции мешает вода, которая разлагает окрашенное соединение. Поэтому при выполнении указанной реакции используют реактивы, растворенные в абсолютном этиловом или метиловом спирте. Оттенок и интенсивность окраски зависят от применяемого спирта, что объясняется различной соль-ватирующей способностью образовавшихся соединений этими спиртами.

Фенобарбитал можно обнаружить при  помощи реакции образования мурексида.

В фарфоровую чашку к сухому остатку, полученному после выпаривания вытяжек из биологического материала, или к небольшому количеству сухого вещества прибавляют 3 капли 3% раствора пероксида водорода и 3 капли реактива, содержащего соль Мора и хлорид аммония.

Содержимое чашки выпаривают, сухой остаток нагревают до появления белых паров.                                                                                                         После охлаждения прибавляют 3 капли 6 н. раствора аммиака.

 

 
 
 
 
Мурексид

При наличии некоторых барбитуратов и тиобарбитуратов появляется розовая  окраска.

От прибавления концентрированной серной кислоты к фенобарбиталу образуется кристаллический осадок кислотной формы этого препарата (бесцветные игольчатые кристаллы, сростки из них, сфероиды).                     Предел обнаружения: 41 мкг фенобарбитала в пробе.

Фенобарбитал со смесью соли железа (III) и иодида калия образует оранжево-коричневые или коричневые кристаллы (призмы и их сростки).

На предметное стекло наносят несколько  капель раствора исследуемого вещества в хлороформе. Этот раствор выпаривают досуха.                               К сухому остатку прибавляют каплю реактива. Через 10-- 15 мин под микроскопом наблюдают форму образовавшихся кристаллов, которые появляются при наличии ряда барбитуратов.Предел обнаружения: 4 мкг фенобарбитала в пробе.

Реакция образования п-нитрофенилэтилбарбитуровой кислоты.

Небольшое количество вещества растворяют в 3 мл концентрированной серной кислоты. К этому раствору прибавляют 0,5 г нитрата калия и нагревают в течение 10 мин на кипящей водяной бане. Затем жидкость охлаждают и прибавляют 10 мл воды. При наличии фенобарбитала образуется кристаллический осадок /г-нитрофенилэтилбарбитуровой кислоты. Осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этилового спирта. Высущенный осадок имеет температуру плавления 279 °С. Нитрогруппу в /г-нитрофенилэтилбарбитуровой кислоте можно восстановить в аминогруппу, а затем п -аминофенилэтилбарбитуровую кислоту можно обнаружить при помощи реакции диазотирования.                                                   Эта реакция специфична для фенобарбитала, но малочувствительна.                                                                    Ее можно использовать для обнаружения фенобарбитала в порошках, таблетках и др.

Эту реакцию дает и бензонал. Ее не дают барбитураты, не содержащие фенильной группы. 

Обнаружение фенобарбитала по УФ- и ИК-спектрам. 

В ИК-области спектра фенобарбитал (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1703, 1756 и 1406 см ^-1. К сухому остатку, полученному при выпаривании вытяжек из биологического материала или лекарственных форм, прибавляют 5 мл воды.

 После растворения сухого остатка полученный раствор фильтруют, затем к фильтрату прибавляют 1 каплю 2 н. раствора аммиака (рН~10) и снимают спектр поглощения. При этом 5,5-замещенные (барбамил, барбитал, бутобарбитал, фенобарбитал,циклобарбитал, этаминал) и 1,5,5-замещенные (гексенал, гексобарбитал) барбитуровой кислоты имеют максимум поглощения при длине волны около 240 нм, а производные тиобарбитуровой кислоты имеют 2 максимума (при 305 и при 255 нм).

Если к этому раствору прибавить 1—2 капли 2 н. раствора серной кислоты (рН~2), то максимум поглощения 1,5,5- и 5,5-замещенных барбитуровой кислотыисчезает. В этих условиях для тиобарбитуратов максимумы поглощения смещаются до 290 и 239 нм.        После прибавления к указаннымрастворам 1—2 капель 4 н. раствора гидроксида натрия (рН~13) появляется максимум поглощения 1,5, 5-замещенных барбитуровой кислоты при 240 нм, а для 5,5-производных этой кислоты — при 255 нм. 

Один из фотоколориметрических  методов количественного определения  барбитуратов, разработанный В. И. Поповой, приводится ниже.

Сухие остатки барбитуратов, выделенных из биологического материала методом  изолирования этих веществ водой, подкисленнойсерной кислотой (см. выше), в зависимости от исследуемого барбитурата растворяют в хлороформе или в метиловом спирте.

Сухие остатки барбитала, гексенала, фенобарбитала и циклобарбитала  растворяют в 6 мл хлороформа, а сухие остатки барба-мила и этаминала — в 2 мл метилового спирта.

Объемы растворов барбамила и этаминала в метиловом спирте доводят хлороформом до 6 мл.                                                                       К полученным растворам барбитуратов прибавляют по 5 мл 0,125% раствора ацетата кобальта в метиловом спирте и по 1 мл 50 %-го раствора изопропиламина в метиловом спирте.

Оптическую плотность окрашенных в фиолетовый цвет растворов измеряют при помощи фотоэлектроколориметра ФЭК-М (светофильтр зеленый, кювета 20 мм) или с помощью другой марки фотоэлектроколориметра.

 

 

 Обнаружение фенобарбитала методом хроматографии. 

Условия обнаружения фенобарбитала  методом хроматографии в тонком слое силикагеля такие же, как и условия обнаружения барбамила.

На хроматографической пластинке (9X12 см), покрытой тонким слоемсиликагеля, закрепленным гипсом, отмечают линию старта, на которую наносят каплю хлороформной вытяжки из кислого раствора, а правее на расстоянии 2 см от нее наносят каплю раствора «свидетеля» (0,01 %-й раствор препарата в метиловом спирте). Пятна на пластинке подсушивают на воздухе, а затем пластинку помещают в камеру для хроматографирования, насыщенную парамирастворителей (хлороформ- н -бутанол-25 %-й раствор аммиака в соотношении 70 : 40 : 5). Когда фронт растворителей поднимется на 10 см выше линии старта, пластинку вынимают из камеры, подсушивают и опрыскивают 0,02 %-м хлороформным растворомдифенилкарбазида, затем раствором сульфата ртути.

При наличии фенобарбитала пятна на хроматограмме приобретают сине-фиолетовую или красно-фиолетовую окраску.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.3.Химико-токсикологический  анализ отравления анабазином.

Анабазин — алкалоид, содержащийся в ежевнике безлистном. Небольшие количества анабазина содержатся в табаке. Основаниеанабазина представляет собой бесцветную маслянистую жидкость, которая хорошо растворяется в воде и ряде органическихрастворителей.

Анабазин экстрагируется органическими растворителями как из кислых, так и из щелочных водных растворов. Однако большие количества анабазина экстрагируются из щелочных водных растворов, из которых он перегоняется с водяным паром без разложения. 

Анабазина гидрохлорид применяется в виде таблеток для облегчения отвыкания от курения. Сумма сульфатов алкалоидов, выделенных из ежевника безлистного, в смеси с хозяйственным мылом применяется в сельском хозяйстве для борьбы с вредителями растений. Для указанной цели также применяется анабадуст. Анабазин применяется в ветеринарии для борьбы с вшивостью животных, для лечения стригущего лишая и чесотки у животных и т. д.