Полный фармакопейный анализ лекарственного препарата «Ортофен»

     Вторичные амины также обладают физиологическим эффектом. 

     1.4 Методы анализа лекарственного препарата «Ортофен» 

     Ортофен по физическим свойствам белый или белый с кремоватым оттенком, светло - кремового цвета кристаллический порошок, без запаха.

     Ортофен представляет собой натриевую соль, мало растворимую в воде, легко - в метаноле и этаноле, практически нерастворимую в хлороформе.

     К ФС на Ортофен (натрия диклофенак) прилагается рисунки ИК- спектров, полосы которых должны полностью соответствовать ИК - спектрам испытуемым лекарственным веществам в области 4000 - 400 см^-1 .

     Сущность метода: Инфракрасная (ИК) спектроскопия характеризуется широкой информативностью, что создаёт возможность объективной оценки подлинности и количественного определения лекарственных веществ. ИК - спектр однозначно характеризует все структуру молекулы. Различия в химическом строении меняют характер ИК - спектра. Важные преимущества ИК - спектрофотомерии - специфичность, быстрота выполнения анализа, высокая чувствительность, объективность получаемых результатов, возможность анализа лекарственных веществ в кристаллическом состоянии.

     ИК - спектры измеряют, использую обычно взвеси лекарственных веществ в вазелиновом масле, собственное поглощение которого не мешает идентификации анализируемого соединения. Для установления подлинности используют, как правило, расположенную в интервале частоту 650 до1800 см^-1 так называемую область «отпечатков пальцев» (650-1500 см^-1), а также валентные колебания химических связей. В ГФ ХI рекомендованы два способа установления подлинности лекарственных веществ ИК - спектров. Один из них основан на сравнении ИК - спектров испытуемого вещества и его стандартного образца. Спектры должны быть сняты в идентичных условиях, т.е. образцы должны быть в одинаковом агрегатном состоянии, в одной и той же концентрации, единой должна быть скорость регистрации и т.д. Второй способ заключается в сравнении ИК - спектра испытуемого вещества с его стандартным спектром. В этом случае необходимо строго соблюдать условия, предусмотренные для снятия стандартного спектра, приведенные в соответствующей НТД (ГФ, ВФС, ФС). Полное совпадение полос поглощения свидетельствует об идентичности вещества. Однако полиморфные модификации могут давать различные ИК - спектры. В таком случае для подтверждения идентичности необходимо перекристаллизовать испытуемые вещества из одного и того же растворителя и вновь снять спектры. Подлинность устанавливают так же с помощью УФ - спектров. Раствор ортофена в 0,1 м натрия гидроксиде, максимум поглощения при 276 нм и минимум при 249 нм. Метод ультрафиолетовой спектрофотомерии используют также для количественного определения ортофена.

     Сущность метода: Ультрафиолетовая спектрофотомерия - наиболее простой и широко применяемый в фармации адсорбционный метод анализа. Его используют на всех этапах фармацевтического анализа лекарственных препаратов (испытания подлинности, чистоты, количественного определения). Разработано большое число способов качественного и количественного анализа лекарственных форм методом ультрафиолетовой спектрофотомерии. Для идентификации могут быть использованы атласы спектров лекарственных веществ, систематизирующие сведения о характере спектральных кривых и значениях удельных показателей поглощения.

     Известны различные варианты использования метода УФ - спектрофотометрии для идентификации. При испытаниях на подлинность идентифицируют лекарственные вещества по положению максимума светопоглощения. Чаще в фармакопейных статьях приведены положения максимума (или минимума) и соответствующие им значения оптических плотностей. Иногда используют метод, основанный на вычислении отношения оптических плотностей при двух длинах волн (они обычно соответствуют двум максимумам или максимуму и минимуму светопоглощения). Идентифицируют целый ряд лекарственных веществ также по удельному показателю раствора. Количественный спектрофотометрический анализ целесообразно комбинировать с установлением подлинности по УФ- спектру. В этом случае раствор, приготовленный из одной навески, можно использовать для обоих этих испытаний. Чаще всего при спектрофотометрических определениях применяют способ, основанный на сравнении оптических плотностей анализируемого и стандартного растворов. Определенных условий анализа требуют лекарственные вещества, способные образовывать кислотно-основные формы в зависимости от рН среды. В таких случаях необходимо предварительно подбирать условия, в которых вещество в растворе полностью будет находиться в одной из таких форм.

     В ГФ ХI расширена область применения УФ - спектрофотометрии. Метод рекомендован для анализа многокомпонентных систем, а также для анализа лекарственных веществ, которые сами не поглощают свет в ультрафиолетовом и видимом областях спектра, но могут быть превращены в поглощающие свет соединения с помощью различных химических реакций.

     Для испытания на подлинность используют реакции солеобразования и комплексообразования. При добавлении к нейтральному раствору натрия диклофенака по 2 капли растворов солей тяжелых металлов: 2 % нитрата серебра, 3% хлорида железа (III), 10 % сульфата меди (II) выпадает соответственно белый, желто-коричневый, светло-зеленый осадок.

     Под действием концентрированной серной кислоты кристаллы ортофена приобретают малиновое окрашивание (реакцию выполняют на часовом стекле). Окрашенные продукты окисления получаются при действии растворами дихромата калия, нитрата натрия, перманганата калия, йодата калия в той же кислоте. Реактив Марки образует зеленовато-белое кольцо при наслаивании на раствор ортофена в концентрированной серной кислоте.

     Ортофен даёт характерную реакцию на ион натрия и на хлориды в фильтре (после прокаливания в тигле и растворении содержимого в воде).

     При добавлении к водному раствору ортофена разведенной хлороводородной кислоты выпадает белый осадок 2- [2,6 -(дихлорфенил) - амино] - фенилуксусной кислоты, которая частично превращается в индолинон.

     При испытании на чистоту ортофен устанавливают методом ВЭЖХ наличие примесей промежуточных продуктов синтеза: 2- [2,6 -(дихлорфенил) - амино] - фенил уксусной кислоты и N- (2,6- дихлорфенил) индолина - 2 используют подвижную фазу ментол - 0,1%- ный раствор ортофосфорной кислоты (6:4), детектор - спектрофотометрический (длина волны 256 нм).

     Сущность метода: Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) - это метод колоночной хроматографии, в котором подвижной фазой (ПФ) служит жидкость, движущаяся через хроматографическую колонку, заполненную неподвижной фазой (сорбентом). Колонки для ВЭЖХ характеризуются высоким гидравлическим давлением на входе в колонку, поэтому ВЭЖХ иногда называют «жидкостной хроматографией высокого давления».

     В зависимости от механизма разделения веществ различают следующие варианты ВЭЖХ: адсорбционную, распределительную, ионообменную, эксклюзионную, хиральную и др.

     В адсорбционной хроматографии разделение веществ происходит за счет их различной способности адсорбироваться и десорбироваться с поверхности адсорбента с развитой поверхностью, например, силикагеля.

     В распределительной ВЭЖХ разделение происходит за счет различия коэффициентов распределения разделяемых веществ между неподвижной (как правило, химически привитой к поверхности неподвижного носителя) и подвижной фазами.

     По полярности ПФ и НФ ВЭЖХ разделяют на нормально-фазовую и обращенно-фазовую.

     Нормально-фазовым называют вариант хроматографии, в котором используются полярный сорбент (например, силикагель или силикагель с привитыми NH₂- или CN-группами) и неполярная ПФ (например, гексан с различными добавками). В обращенно-фазовом варианте хроматографии используют неполярные химически модифицированные сорбенты (например, неполярный алкильный радикал C₁₈) и полярные подвижные фазы (например, метанол, ацетонитрил).

     В ионообменной хроматографии молекулы веществ смеси, диссоциировавшие в растворе на катионы и анионы, разделяются при движении через сорбент (катионит или анионит) за счет их разной скорости обмена с ионными группами сорбента.

     В эксклюзионной (ситовой, гель-проникающей, гель-фильтрационной) хроматографии молекулы веществ разделяются по размеру за счет их разной способности проникать в поры неподвижной фазы. При этом первыми из колонки выходят наиболее крупные молекулы (с наибольшей молекулярной массой), способные проникать в минимальное число пор неподвижной фазы, а последними выходят вещества с малыми размерами молекул.

     часто разделение протекает не по одному, а по нескольким механизмам одновременно.

     Метод ВЭЖХ может применяться для контроля качества любых негазообрразных анализируемых веществ. Для проведения анализа используют соответствующие приборы - жидкостные хроматографы.

     Количественно ортофен определяют методом неводного титрования в среде ледяной уксусной кислоте, титруют 0,1 м раствором хлорной кислоты (индикатор - кристаллический фиолетовый). Точку эквивалентности устанавливают потенциометрически.

     Сущность метода: Титрование в среде неводных растворителей (неводное титрование) позволяет количественно определить органические вещества, обладающие кислотными и основными свойствами, но трудно растворимые в воде. Можно осуществить выбор органического растворителя, который способен изменить силу кислотных или основных свойств анализируемого вещества. В качестве титрантов используются растворы сильных кислот или сильных оснований.

     Недостатком неводного титрования является необходимость иметь герметизированную титровальную установку. Работа ведется с весьма токсичными летучими растворителями.

     Метод неводного титрования широко используется в фармацевтической анализе, поскольку многие синтетические и природные органические лекарственные вещества проявляют слабые основные или слабые кислотные свойства.

     Неводное титрование органических оснований (и их солей) выполняют, используя в качестве растворителя безводную уксусную кислоту или уксусный ангидрид. Сочетают также уксусную кислоту с уксусным ангидридом, который улучшает условия титрования. Титрантом служит раствор хлорной кислоты, а индикатор - кристаллический фиолетовый, тропеолина 00 или метилового оранжевого. Растворы титранта и индикатора готовят в безводной уксусной кислоте.

     Хлорной кислотой в неводной среде титруют соли сильных оснований и слабых кислот (калия ацетат): 

      R-СООК + НClО₄                КClО₄ + R-СООН 

     Слабое органическое основание (R₃N) при растворении в безводной уксусной кислоте становиться сильным сопряженной кислотой:  

      R₃N + СН₃СООН            R₃N * Н⁺ + СН₃СОО^- 

     При растворении хлорной кислоты в уксусной последняя проявляет свойства сильного сопряженного основания, образуя перхлорат - и ацетат - ион: 

      СН₃СООН + НClО₄                  ClО₄^- + СН₃СООН₂⁺ 

     Последний нейтрализует ацетат - ионы: 

      СН₃СОО^- + СН₃СООН₂⁺               2СН₃СООН 

     а перхлорат -ион взаимодействует с катионом основания: 

      R₃N*Н⁺ + ClО₄^-                  [R₃N*Н⁺]ClО₄^- 

     Суммарный процесс нейтрализации слабого органического основания хлорной кислоты выглядит следующим образом: 

      R₃N + НClО₄                    [R₃N*Н⁺] ClО₄^- 

     Данный процесс происходит при титровании лекарственных веществ основного характера, относящихся к числу производных пиразолона, пиридина, алкалоидов, представляющих собой слабые основания. Химизм реакции при неводном титровании солей слабых органических оснований (R₃N * НА), включающий анион (А^-), можно в общем виде представить следующим образом: 

     R₃N * НА = R₃N * Н⁺ + А^-

     А^- + СН₃СООН = НА + СН₃СОО^-

     НClО₄ + СН₃СООН = ClО₄^- + СН₃СООН₂⁺

     СН₃СОО^- + СН₃СООН₂⁺ = 2СН₃СООН

     Суммируя, получим общее уравнение: 

      R₃N * НА + НClО₄ [R₃N* Н] ⁺ ClО₄^-