Роль микроорганизмов в развитии кариеса

Таким образом, кариес представляется как длительный динамический процесс, включающий повторяющиеся периоды деминерализации эмали слабыми органическими кислотами микробного происхождения с последующей реминерализацией эмали слюной. На развитие кариеса влияют различные факторы. 
 
 
 
 

Определение уровней концентрации Streptococcus mutans в клинических условиях

22.12.2009

Новый инструмент для быстрой оценки риска возникновения  и развития кариеса.

Laurence J. Walsh DDS, Австралия

Значительную  часть клинической практики составляет реставрационная терапия, также  как и повторное лечение кариеса  и его последствий, т.к наиболее частой причиной несостоятельности реставраций является возникновение вторичного кариеса.

Наряду с пломбированием полостей (которые естественным образом  являются результатом развития кариозного процесса), необходимо блокировать  развитие болезни еще на ранних «дополостных» стадиях, уделяя внимание критическим факторам риска, питающим процесс развития болезни – анализируя образ жизни пациента, выполняя тесты слюны и проводя тестирование на наличие соответствующей микробной активности [1, 6].

Вооружившись  результатами этих тестов, клиницист  может давать пациенту индивидуальные рекомендации относительно методов  устранения или минимизации факторов риска развития кариеса. Также становится возможным выполнять необходимое  тестирование непосредственно у кресла пациента с целью отслеживания динамики процесса в соответствии с данными рекомендациями.

Не так давно  в литературе были описаны комплексные  системы оценки и управления рисками  развития кариеса – такие как STEM (the System for Total Environmental Management – Система Комплексной Оценки Состояния полости рта) [7-9], которая была создана и усовершенствована автором за два последних десятилетия в его клинической практике. Эта система базируется на концепции, согласно которой состояние полости рта характеризуется физическими факторами, ионной средой и микробной активностью, которые можно измерить, оказать на них определенное воздействие и провести мониторинг результатов с течением времени.

Спектр диагностических  тестов, которые на сегодняшний день могут быть использованы на практике, включает тест физических параметров слюны (объем секреции, pH и буферная емкость) [1,2,5], тест наличия зубной бляшки и ее ферментации в ответ на воздействие сахара [6,9], также как и тест на наличие главного патогена кариеса – Streptococcus mutans [9]. Концентрация S. mutans в слюне является важным параметром для индивидуального определения риска возникновения и развития кариеса у пациентов при рассмотрении в сочетании со всем объемом доступной клинической информации.

Прямой  иммунотест

Полученный образец  слюны может быть протестирован  с использованием моноклональных антител  в рамках непосредственной оценки концентрации определенной бактериальной флоры  или альтернативно – на наличие  в слюне соответствующих антител (как индикатор иммунного ответа на значительную колонизацию бактериальной флоры в течение продолжительного времени).

Технология прямой оценки, использованная в GC Saliva Check Mutans, обеспечивает ряд преимуществ по сравнению с традиционными подходами, связанными с посевом культур mutans streptococci, которые обладают низкой специфичностью и фиксируют присутствие спектра неболезнетворных бактерий, тогда как прямой иммунотест обладает практический 100-процентной специфичностью из-за использования в качестве «первого слоя» моноклональных антител для определения наличия специфических бактерий, представляющих интерес.

Кроме того, тесты, основанные на использовании культур, требуют наличия витальных бактерий и инкубатора для создания оптимальной  температуры (37°C) и определенного времени (обычно 48 часов) для их роста, прежде чем будет получен результат. Срок годности таких тестов также ограничен из-за уменьшения количества компонентов роста, что связано с изменениями температурных режимов [9,10].

В свою очередь  метод непосредственного определения обеспечивает получение полуколичественной оценки уровня концентрации S.mutans в слюне в течение 15 минут – без необходимости использования специализированного оборудования и культивации культур бактерий. Поскольку тест не основан на росте количества бактерий, то не возникает таких проблем как контаминация образца другими бактериями, что позволяет избежать отсутствия селективности.

Как работает тест

Тест Saliva Check Mutans использует высокоспецифический иммунохроматографический процесс. Бактерии Streptococcus mutans в образце слюны взаимодействуют с содержащимися на тестовой полоске меченными коллоидным золотом мышиными моноклональными антителами anti-S. mutans. Этот комплекс затем взаимодействует с другими антителами anti-S. mutans, которые формируют красную полосу в окошке Т. Непрореагировавшие с Streptococcus mutans моноклональные антитела далее попадают в следующую зону тест-полоски, где взаимодействуют с анти-иммуноглобулином в окошке C, формируя контрольную красную полосу.

Как доказательство специфичности теста Saliva Check Mutans была протестирована кросс-реактивность к  образцам, позитивным по отношению  к следующим бактериям: Streptococci sobrinus, Streptococci sanguis,

Streptococci salivarius, Streptococci mitis, Lactobacillus casei, Streptococcus gordonii, Streptococcus rattus, Actinomyces naeslundii, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivarius, Porphyromonas

gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis, Eikenella corrodens, Fusobacterium nucleatum Treponema denticola, Campylobacter rectus, Myxococcus xanthus и Escherichia coli. В каждом из этих случаев получен отрицательный результат.

Прямой иммунотест обеспечивает получение результатов  быстро и экономично с точки зрения финансовых затрат, непосредственно у кресла пациента, что позволяет сформулировать индивидуализированные рекомендации, основывающиеся на полученных результатах.

Это невозможно в тестах с культивацией культур, поскольку для получения результата нужно гораздо больше времени.

Данные, полученные в результате клинических исследований, демонстрируют, что результаты, полученные с помощью прямого иммунотеста  по определению в слюне концентрации Streptococcus mutans непосредственно в клинических  условиях, хорошо коррелируют с реальными уровнями концентрации mutans streptococci в зубной бляшке и ее кислотопродуцирующими свойствами [11-13]. Достоверность такого теста также проверялась с использованием цепной реакции полимеразы в реальном времени с использованием в качестве «золотого стандарта» специфических образцов Streptococcus mutans. Этот тест, в котором было использовано 89 образцов слюны, продемонстрировал чувствительность на уровне 90.9% (10 из 11 образцов), специфичность составила 97.4% (76 из 78 образцов). При этом позитивное предсказанное значение равнялось 83.3% (10 из 12 образцов), а негативное предсказанное значение составило 98.7% (76 из 77 образцов).

Эти высокие  показатели достоверности обуславливают  важность выполнения мониторинга пациентов  с течением времени по мере перехода из категории «высокий риск» (позитивный результат теста) к статусу с низким риском развития кариеса.

Выполнение  теста

Пациенту дают пожевать воск из набора в течение 1 минуты для того, чтобы стимулировать  секрецию слюны, которая затем собирается в прилагаемый одноразовый пластиковый контейнер (рис. 1). Использование тампона (в комплект не входит) позволяет получить образец слюны пациента в том случае, если он испытывает сложности с собиранием слюны в контейнер (к примеру пациент – ребенок или человек с ограниченными возможностями).

Результат теста  может быть неточным, если образец  слюны был получен менее, чем  через 1 час после принятия пищи, употребления жидкостей, чистки зубов  или применения ополаскивателей  рта, препятствующих образованию бляшки.

Поэтому пациент  должен избегать данных процедур как  минимум за 1 2 час до назначенного времени стоматологического приема.

Для того, чтобы  подготовить образец слюны к  анализу, необходимо последовательно  добавить 2 реагента и смешать их с помощью легкого встряхивания. Первый представляет собой щелочной раствор гидрооксида натрия, который должен растворить вязкие компоненты слюны, в особенности глюканы, что обеспечит легкое прохождение образца по поверхности тест-полоски. Второй реагент – это органическая кислота, имеющая желтый цвет, поскольку она также включает в себя индикатор уровня pH. Этот индикатор должен сменить цвет на светло-зеленый (демонстрируя нейтральный pH), что означает, что произошла реакция нейтрализации.

Затем образец  вносится в окошко на конце тест-полоски, и реакция протекает в течение 15 минут при комнатной температуре. В контрольном окне (C) появляется широкая красно-коричневая полоса, демонстрируя корректность работы прибора.

Появившаяся в  тестовом окне (T) тонкая красная полоса демонстрирует позитивный результат – это означает, что уровень концентрации Streptococcus mutans в слюне высок (<5 x 105 КОЕ/мл слюны), и пациент подвержен высокому уровню риска развития кариеса (рис. 2).

Если по истечении 15 минут в окошке T линия не появляется, это означает низкий уровень концентрации S.mutans, и, соответственно, низкий риск развития кариеса.

Заключение

Исходя из современного представления о причине возникновения  кариеса зубов его предупреждение может быть осуществлено комплексом мер, направленных, с одной стороны, на устранение кариесогенной ситуации в полости рта, а с другой - на повышение резистентности тканей зуба.