Выделение, индикация и идентификация возбудителя лейкозу крупного рогатого скота

     Дифференциальный  диагноз. Лейкоз необходимо отличать от актиномикоза, туберкулеза, паратуберкулеза и бруцеллеза. При актиномикозе поражаются, главным образом, лимфатические узлы головы и грудной области (подчелюстные, заглоточные, околоушные и др.). Они плотной консистенции, с инкапсулированными абсцессами. В центре актиномикозного ума (гранулемы) гистологически обнаруживают друзы гриба. При туберкулезе чаще пораженш в виде узелков, имеющих специфическое гистологическое строение, находятся в легких, кишечнике. Для паратуберкулеза характерно наличие изменений в кишечнике и брыжеечных лимфатических узлах. В кишечнике развиваются продуктивное воспаление и очаговые инфильтраты из эпителиоидных клеток, в результате чего стенка утолщается в 5 и более раз. В лимфатических узлах отмечают обширные скопления из эпителиоидных элементов с наличием среди им гистиоцитов и клеток типа Лангерганса. Специфическим методом окраски выявляют бактерии паратуберкулеза, локализующиеся в эпителиоидных и гигантских клетках. Бруцеллез диагностируют с помощью РСК, РА и аллергической пробы. 

Иммунитет и специфическая  профилактика. Проблема специфической профилактики лейкоза КРС не решена, хотя исследования в этой области продолжаются и по сегодняшний день. Против лейкоза КРС получена рекомбинантная вирусвакцина, содержащая генетическую информацию, кодирующую gp51 и gp30 поверхностного АГ. Также показана возможность вакцинации КРС против лейкоза гетерологичными клетками млекопитающих, способными продуцировать оболочечные АГ ВЛКРС и его внутренний белок р24.

     Опубликованы  результаты исследований по получению  и использованию рекомбинантных вирусов осповакцины, включающих либо полный ген белка оболочки env, либо только фрагмент гена env с последовательностью, кодирующей гликопротеин gp51 env и часть gp30 ВЛКРС. Вакцинация овец рекомбинантными BLV-вакцинами, содержащими полный ген env, защищает овец от инфекции ВЛКРС, свидетельством чего служит отсутствие персистенции высоких титров анти-gp51-AT по сравнению с невакцинированными ВЛ инфицированными животными, ярковыраженная пролиферативная реакция клеток СД-4 вакцинированных овец на специфические синтетические пептиды gp51 ВЛКРС и отсутствие провируса ВЛКРС у вакцинированных животных спустя 4 мес. после заражения диким вирусом.  
 
 
 
 
 
 
 
 

     Собственные исследования.

     РДП. Благодаря простоте, специфичности и достаточно высокой эффективности эта реакция получила наибольшее применение с гликопротеинным АГ ВЛКРС. Из вируса, осажденного методом ультрацентрифугирования культуральной жидкости краткосрочных культур лейкоцитов лейкозных животных, очищенного в градиенте плотности сахарозы и обработанного эфиром, получают АГ, который используют в РДП. С помощью этого АГ в сыворотках крови инфицированных ВЛКРС животных выявляют ПА к внутреннему полипептиду вируса. РДП с гликопротеидным AT - более чувствительный метод выявления инфицированных ВЛКРС животных, чем РДП с полипептидным АГ РДП (РИД) в геле агара, направленная на выявление анти-gр51 AT, используется в качестве основного диагностического теста, регламентирующего международную и внутреннюю торговлю племенными животными, спермой и эмбрионами. При первичном обследовании сывороток крови одной РИД считается достаточно для объявления стада свободным от ВБЛ-инфекции. РИД применяется в системе противолейкозных мероприятий в неблагополучных хозяйствах.

     Специфические ПА к ВЛКРС появляются через 2 мес. после инфицирования и сохраняются пожизненно. Для постановки РДП используют диагностический набор, в состав которого обязательно должны входить специфический АГ ВЛКРС, специфическая положительная сыворотка крови КРС Реакцию ставят макро- и микрометодами. Для изготовления АГ используют клеточную линию FLK-BLV. Из культуральной жидкости вирусный АГ выделяют методом преципитации сульфатом аммония или полиэтиленгликолем. Но наиболее технологичным методом выделения вирусного АГ считают ультрафильтрацию на полупроницаемых мембранах. На результат реакции иммунодиффузии влияют многие факторы качество АГ и контрольных сывороток, количественные соотношения АГ и AT, качество агаpa, pH и ионная сила буфера, температура, диаметр лунок и расстояние между ними. Для постановки РИД выпускают диагностические наборы. Они представляют собой наборы, состоящие из 2-8 препаратов. Обязательными компонентами каждого набора являются препараты тест-системы: вирусный АГ и антисыворотка, которые в результате специфического взаимодействия АГ (gp51 ВБЛ) и AT в процессе диффузии формируют в геле агара нерастворимый комплекс в виде опалесцирующей полосы. Дополнительно наборы могут комплектоваться сухой солевой смесью агара, стерильным разбавителем для вирусного АГ и контрольньми сыворотками, которые поставляются в жидком или лиофилизированном виде. В последнем случае наборы комплектуют соответствующими разбавителями контрольных сывороток. Наборы рассчитаны на 90-500 исследований и содержат 3-5 мл вирусного АГ.

     РИД проходит в 0,8-1,0% геле агара, который  готовят на трис-НС! или боратном буферах в диапазоне pH 7,2-8,6, содержащим 8-8,5% NaCl. Методика постановки реакции одинаковая для всех диагностикумов и предусматривает заполнение лунок АГ, антисывороткой и испытуемыми сыворотками по схеме 1:2:4 или 1:3:3. Принято 2 стандарта на диаметр лунок и расстояние между ними: 1 вариант в странах ЕЭС, тогда как в США, Канаде и странах СНГ приняты параметры, соответствующие второму варианту (таб 1.). 

Таблица 1. Параметры лунок, рекомендуемые для постановки РИД

 

     Минимальные необходимые требования, которым  должен удовлетворять диагностический набор, заключаются в следующем: АГ должен содержать оболочечный гликопротеин ВБЛ, стандартизованный по референтной сыворотке -1; референтная сыворотка Е-4, разведенная отрицательной сывороткой в соотношении 1:10, должна быть выявлена как положительная без повторной постановки реакции или предварительной концентрации. Референтные сыворотки Е-1 и Е-4 изготовлены в Национальной ветеринарной лаборатории Дании и предназначены для стандартизации всех диагностических наборов для постановки РИД и ИФА.

     Реакцию учитывают через 48 ч и при следующих  показаниях контролей: наличие четкой контрольной полосы преципитации между АГ и специфической положительной сывороткой и отсутствие таковой с отрицательной контрольной сывороткой. Животных, сыворотки крови которых положительно прореагировали в РДП, считают зараженными вирусом лейкоза. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Министерство  аграрной политики Украины

Полтавская  государственная  аграрная академия

     Факультет ветеринарная медицина

                                             Кафедра инфекционной патологии 
 

     КУРСОВАЯ  РАБОТА

     По  ветеринарной вирусологии

     На  тему:

     "Выделение,  индикация и идентификация  возбудителя лейкозу крупного рогатого скота” 

                                Выполнил студент

                            3 курса 2 группы  

                                                      Судовцовцов Александр

                                                       Николаевич                                                                                                

                                Курсовую    работу

                                                                 Проверил

                                 Оценка           число 
 

     ПОЛТАВА   2007

     Содержание

1.Введение.

2.Осмотр  литературы:

   А)Устойчивость;

   Б)Антигенная структура  и вариабельность;

   В)Локализация вируса;

   Г)Антигенная активность;

   Д)Культивирование; 

   Э)Источники и  пути передачи  инфекции;

   Е)Взятие и подготовка  материала.

3.Индикация  и идентификация  вируса.

4.Собственные  исследование.

5.Вывод.

6.Список  литературы. 
 
 
 
 
 
 
 
 

     Вывод.

     Последние годы лейкоз крупного рогатого скота значительно распространился и на территории Украины. Болезнь создает значительный экономический ущерб, который способствует нарушению племенной работы, выбраковке высокопродуктивных коров, забою быков-производителей, отправке на мясо племенного молодняка от больных на лейкоз животных.

     Диагноз лейкоз ставят на основании клинических признаков болезни и лабораторных исследований, а также на основании эпизоотологического распространения болезни. Лабораторные исследования проводятся методом серологического исследования с постановкой реакций РДП, РИД, РИФ.

     Профилактика  обеспечивает недопущение ввода животных, инфицированных ВЛКРС. Всех вновь поступивших животных карантируют в течение 30 суток, исследуют серологически на лейкоз, оставляют в хозяйстве только отрицателно реагирующих животных. Осуществляют комплекс ветеринарносанитарных, зоогигиенических, селекционно-генетических и организационно-хозяйственных мероприятий, направленных на повышение общей резистентности организма животных. Ферму считают благополучной по лейкозу после вывода на убой всех положительно реагирующих животных и получения двух подряд отрицательных результатов по всему оздоравливаемому поголовью крупного рогатого скота. 
 
 
 
 
 
 

СПИСОК  ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авилов В.М. "Ветеринария", 1995г.

2. Васин А.В. "Распознавание и меры борьбы с лейкозом человека и животных". Белая Церковь, 1986г.

3. Сюрин В.Н. "Вирус лейкоза КРС", 1986г.

4. Сюрин В.Н. "Частная ветер вирусология", Колос 1979г.

5. Сюрин В.Н. "Диагностика вирусных болезней животных", Агропромиздат 1991г.

6. Каришева  А.Ф. "Спеціальна епізоотологія", м. Київ «Вища освіта» 2002р.  
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Содержание. 

1. Введение
2. Осмотр литературы

2.1.Устойчивость

         2.2.Антигенная структура

     2.3.Антигенная  вариабельность

     2.4.Локализация вируса, вирусоносительство

     2.5.Антигенная активность

     2.6.Культивирование

     2.7.ГА свойства

     2.8.Источник и пути передачи

     2.9.Диагностика

     2.10.Индикация и идентификация вируса

     2.11.Дифференциальный диагноз

     2.12.Иммунитет и специфическая профилактика

3. Собственное исследование
4. Вывод
5. Список литературы