Микробиологическая лаборатория. Микроскоп и техника микроскопирования

   Общее увеличение микроскопа определяется произведением  увеличения объектива на увеличение окуляра. Например, если увеличение  объектива 90^х, а окуляра 15^х, то общее увеличение равно 1350^х.

   Осветительное устройство расположено под предметным столиком. Его назначение – освещение  поля зрения препарата. В осветительном  устройстве различают зеркало,  либо осветитель, и конденсор с ирисовой диафрагмой 14.

   Конденсор представляет собой систему  сильных  линз и служит для усиления яркости  освещения рассматриваемого объекта. Он собирает отраженные от зеркала  лучи света в пучок и концентрирует  их в плоскости препарата. Передвигается  конденсор в вертикальном направлении  при помощи винта 15. При опускании  конденсора поле зрения микроскопа затемняется, при поднятии – освещается.

   Ирисовая  диафрагма расположена под конденсором. Она состоит из тонких металлических  сегментов, которые при помощи рычажка  можно сдвигать или раздвигать, регулируя  этим поступление света в конденсор.

   7) Что такое сухие  и иммерсионные  объективы?

   Объективы малого увеличения (3^х, 5^х, 8^х, 9^х, 10^х) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата. Объективы среднего увеличения (20^х, 40^х, 60^х) – для изучения крупных клеток микроорганизмов (например, грибов). Эти объективы называют сухими, поскольку при микроскопии между фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Вследствие различия показателей преломления воздуха (n = 1) и стекла (n = 1,52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив.

   Объективы больших увеличений (85^х, 90^х) называются иммерсионными. Их применяют для изучения мелких форм микроорганизмов (например, бактерий). При работе с ними препарат должен быть максимально освещен. Светорассеивание, неизбежное при работе с объективами, в данном случае устраняется благодаря использованию иммерсионных жидкостей, показатель преломления которых близок к показателю преломления стекла. Чаще всего используют кедровое масло, у которого n=1,515. Каплю жидкости наносят на препарат и погружают в нее объектив. Короткое фокусное расстояние объективов большого увеличения ((1,9 - 2,1)мм) позволяет исследовать объект, не поднимая объектив из капли, вследствие чего создается однородная среда между линзой и препаратом.

   Окуляр  состоит из двух линз, заключенных  в общую металлическую оправу. Верхняя линза называется глазной, нижняя – собирательной. Окуляр лишь увеличивает изображение, даваемое объективом. Микроскопы системы «Биолам» снабжены окулярами, дающими увеличение 7^х, 10^х и 15^х (цифры указаны на оправе).

   8) Что означает понятие  «разрешающая способность»  микроскопа? Какова  разрешающая способность  микроскопа серии  «Биолам»?

   Основной  технической характеристикой микроскопа является разрешающая способность  – т.е. минимальное расстояние между  двумя точками рассматриваемого предмета, на котором они не сливаются  в одну и предмет виден отчетливо. В лабораторной практике наиболее широко используются биологические иммерсионные микроскопы серии «Биолам», позволяющие получить увеличение объекта до 1800 раз. Их предельная разрешающая способность равна 0,21 мкм, следовательно, пользуясь этими микроскопами, можно рассматривать объекты величиной не менее 0,21 мкм.

   9) Каковы правила  микроскопии препарата?

   Микроскопию препаратов всегда начинают с установки  света. При работе в дневное время  пользуются естественным освещением, однако чаще прибегают к источникам искусственного света, которые обеспечивают регулируемое освещение (осветители ОИ-19, ОИ-35).

   При установке света конденсор должен быть поднят до упора, ирисовая диафрагма  открыта. Настройка освещения производится с объективом малого увеличения (8^х). Его опускают на расстояние около 0,5 см от предметного столика, затем, глядя в окуляр и вращая зеркало, добиваются равномерного яркого освещения всего поля зрения.

   Приготовленный  препарат помещают на предметный столик, укрепляют клеммами. Микроскопию  начинают с обзорного просмотра  препарата  при малом увеличении. При этом, наблюдая сбоку, опускают объектив при помощи макрометрического винта на расстояние около 1 см от предметного столика. Глядя в окуляр, и медленно вращая макроскопический винт, поднимают тубус до появления отчетливых контуров препарата. Для точной фокусировки пользуются микрометрическим винтом, который вращают не более чем на четверть оборота. На этом этапе при исследовании бактерий можно, медленно передвигая препарат на предметном столике, найти наиболее подходящее для микроскопии поле зрения: участок препарата, на котором микроорганизмы находятся в достаточном для просмотра количества, располагаются в один слой, равномерно.

   При микроскопии со средним увеличением  заменяют объектив малого увеличения на объективы 40^х или 60^х. О центрированном положении объектива свидетельствует щелчок фиксатора внутри револьвера. Глядя в окуляр, еще более медленно поднимают тубус до появления изображения и уточняют фокус микрометрическим винтом.

   Микроскопия при большом увеличении (объектив 90^х) проводится с иммерсионным маслом, каплю которого наносят на препарат. Затем заменяют сухой объектив на иммерсионный, под контролем глаза (вид сбоку) погружая его в масло почти до соприкосновения фронтальной линзы с предметным стеклом. Глядя в окуляр, макрометрическим винтом слегка поднимают тубус до появления изображения препарата, а затем с помощью микроскопического винта добиваются его фокусировки.

   По  окончании работы поднимают тубус, снимают с предметного столика  препарат, опускают конденсор и тщательно  удаляют сухой хлопчатобумажной салфеткой масло с фронтальной  линзы иммерсионного объектива. Остатки иммерсионного масла  могут повредить линзу и ухудшить изображение при микроскопии.

   При микроскопии возможны следующие  ошибки:

   - неполное освещение поля зрения  вследствие неправильного положения  зеркала или неправильного положения  объектива (передвинут на револьвере  микроскопа не до щелчка);

   - тусклое освещение поля зрения  при неправильном положении зеркала,  при опущенном конденсоре или  закрытой диафрагме, а также  при недостаточном количестве  иммерсионного масла на препарате;

   - отсутствие резкости в изображении  предмета – препарат не в  фокусе.

    
    Вывод:  Ознакомились с назначением, устройством, оборудованием и режимом работы микробиологической лаборатории; освоили технику микроскопии микробиологических препаратов. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

   Министерство  образования Республики Беларусь

   Учреждение  образования

   МОГИЛЕВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ  УНИВЕРСИТЕТ ПРОДОВОЛЬСТВИЯ 

   КАФЕДРА «ТЕХНОЛОГИИ ПИЩЕВЫХ  ПРОИЗВОДСТВ» 
 
 
 
 
 
 
 

   Изучение  морфологии бактерий, встречаемых в пищевой

   промышленности. Правила работы с  культурами микроорганизмов 

   Лабораторная  работа №2 

   Специальность 1-25010901 «Товароведение и экспертиза продовольственных  товаров» 
 
 
 
 
 
 
 
 

   Проверил

   Ст.преподаватель

   ____________Титенкова Н. И.

   «__» _________ 2011  

   Выполнила

   Студентка группы ТЭТ-101

   ____________ Лобкова М. Ю.

   «__» _________ 2011  
 
 
 
 
 
 
 

   Могилев 2011

   Министерство  образования Республики Беларусь

   Учреждение  образования

   МОГИЛЕВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ  УНИВЕРСИТЕТ ПРОДОВОЛЬСТВИЯ 

   КАФЕДРА «ТЕХНОЛОГИИ ПИЩЕВЫХ  ПРОИЗВОДСТВ» 
 
 
 
 
 
 
 

   Изучение  морфологии бактерий, встречаемых в пищевой

   промышленности. Правила работы с  культурами микроорганизмов 

   Лабораторная  работа №2 

   Специальность 1-25010901 «Товароведение и экспертиза продовольственных  товаров» 
 
 
 
 
 
 
 
 

   Проверил

   Ст.преподаватель

   ____________Титенкова Н. И.

   «__» _________ 2011  

   Выполнила

   Студентка группы ТЭТ-101

   ____________ Шевцова Е. Н.

   «__» _________ 2011  
 
 
 
 
 
 
 

   Могилев 2011

   ЛАБОРАТОРНАЯ  РАБОТА № 2.

 

   Изучение  морфологии бактерий, встречаемых в пищевой

   промышленности. Правила работы с  культурами микроорганизмов 

   Цель: Ознакомление с морфологией бактерий, часто встречающихся в пищевой промышленности, и методами ее изучения под микроскопом в прижизненных и фиксированных окрашенных препаратах; ознакомление с правилами обращения с культурами микроорганизмов.

   Материалы и оборудование: микроскоп, предметные стекла с луночками и без них, покровные стекла, спиртовки, растворы красителей, микробиологические петли, иммерсионное масло, чистые культуры бактерий. 

   ПРАКТИЧЕСКАЯ  ЧАСТЬ

   Приготовили фиксированные препараты, окрасили их по методу Грама и рассмотрели с иммерсионным объективом. Рассчитали общее увеличение микроскопа:  90^х х15^х=1350^х. 

    В результате получили следующее:

       

   микрококки, гр(+)

стафилококки, гр(+)

   палочки, гр(+)

   Контрольные вопросы:

1. Правила работы с культурами микроорганизмов.

   На  лабораторных занятиях по изучению различных  групп микроорганизмов (бактерии, грибы, дрожжи) студент работает с чистыми  культурами микробов, выращенными из одной клетки или  споры на различных  питательных субстратах. Культуры микроорганизмов  находятся либо в чашках Петри, либо в пробирках, закрытых ватными пробками, которые предохраняют культуры от попадания  в них микроорганизмов из внешней  среды.

   При приготовлении препаратов микроорганизмов, а также при их посевах и  пересевах необходимо  строго соблюдать  правила и порядок работы. Все  работы с культурами микроорганизмов  необходимо проводить в пламени  спиртовки. С питательной среды  микроорганизмы берутся микробиологической петлей, которая предварительно обжигается (фламбируется) в пламени спиртовки.

   Порядок работы должен быть следующим:

     Зажечь спиртовку.

     Взять пробирку с культурой  и поместить ее так, чтобы  она находилась между большим  и указательным пальцем левой  руки, поддерживалась средним пальцем  и находилась в наклонном положении.

     Взять правой рукой микробиологическую  петлю, прокалить ее в пламени  спиртовки, держа вертикально.

     Правой рукой, плотно зажав  ватную пробку между мизинцем  и ладонью, вращательным движением   повернуть пробку, вынуть ее из  пробирки и держать концом  вниз, следя за тем, чтобы она  не касалась окружающих предметов.