Основные направления современной гистологии, их методы исследования

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает элективное выявление муцинов (кроме муцина поверхностного эпителия желудка человека) и кислых гликозаминогликанов в парафиновых и целлоидиновых срезах и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Может быть использован как без докраски другими красителями, так и в сочетании с ядерными красителями – гематоксилином Гарриса и квасцовым кармином, а так же перед постановкой ШИК-реакции. Возможно применение красителя после постановки иммуноцитохимических реакций при использовании диаминобензидинового хромогена.

• Гематоксилин-G (Джилла)

       Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Предназначен для использования в качестве ядерного красителя при постановке иммуноцитохимических реакций в сочетании с различными типами хромогенов (в том числе и с растворимыми в этаноле) и для окраски гематоксилин-эозином. Краситель удобно использовать при автоматизированной окраске гистологических препаратов.

• Гематоксилин-H (Гарриса)

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибротомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах.

Гематоксилин–Н (Гарриса)-БиоВитрум предназначен для  быстрой прогрессивной окраски  материала срочных биопсий, для  окраски гематоксилин-эозином и  для использования в качестве красителя ядер клеток при постановке иммуноцитохимических реакций в сочетании с различными типами хромогенов (в том числе и с растворимыми в этаноле).

• Гематоксилин-Е (Эрлиха)

 

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибратомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит метанола. Гематоксилин Эрлиха может быть использован в качестве ядерного красителя при постановке иммуноцито-химических реакций в сочетании с диаминобензидиновым хромогеном и для окраски гематоксилин-эозином.

• Гематоксилин-К (Карацци)

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Предназначен для использования в качестве ядерного красителя при постановке иммуноцитохимических реакций в сочетании с различными типами хромогенов (в том числе и с растворимыми в этаноле) и для окраски гематоксилин-эозином.

• Гематоксилин-М (Майера)

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Предназначен для использования в качестве ядерного красителя при постановке иммуноцитохимических реакций в сочетании с различными типами хромогенов (в том числе и с растворимыми в этаноле) и для окраски гематоксилин-эозином. 
 
 

• Железный  гематоксилин-V (Вейгерта)

 

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию ядер клеток в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент не содержит этанола и метанола. Предназначен для использования в качестве ядерного красителя при окраске соединительной ткани по Ван-Гизону, Маллори, Массону и в других многоцветных методах окраски гистологических препаратов.

• Перлса

      Краситель для микроскопических препаратов. Используется для гистохимического выявления соединений трехвалентного железа в срезах различных органов и тканей человека и животных. Предпочтительна обработка парафиновых срезов.

• Пикрофуксин по Ван-Гизону

 

      Краситель для микроскопических препаратов. Обеспечивает визуализацию волокон соединительной ткани и дифференциальную окраску мышечных и волокнистых соединительных тканей в срезах (парафиновых, целлоидиновых, криостатных, изготовленных на замораживающем микротоме). Реагент не содержит этанола и метанола. 

• Толуидиновый  синий для тучных клеток

      Краситель для микроскопических препаратов. Используется для выявления тучных клеток в препаратах разных тканей человека и животных, а также при окраске срезов головного и спинного мозга по методу Ниссля. Предпочтительна обработка парафиновых и целлоидиновых срезов.

• Толуидиновый синий модификация Ниссля

      Краситель для микроскопических препаратов. Используется при окраске срезов головного и спинного мозга по Нисслю, а также для выявления тучных клеток в препаратах разных тканей человека и животных. Предпочтительна обработка парафиновых и целлоидиновых срезов.

    

      Эозины - общее название группы органических синтетических красителей, окрашивающих цитоплазму клеток и коллагеновые волокна в различные оттенки красного, розового и оранжевого цветов. Наиболее известный из них- эозин-Y (эозин желтоватый) рекомендован для докраски препаратов после окраски гематоксилином. Эозин может быть использован и в сочетании с окраской основными анилиновыми красителями (окраска по Доминичи).

• Эозин - водный раствор

      Цитоплазматический краситель для микроскопических препаратов. Окрашивает цитоплазму клеток и волокна межклеточного вещества в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент предназначен для использования в качестве цитоплазматического красителя после окраски гематоксилином.

• Эозин концентрированный

      Цитоплазматический краситель для микроскопических препаратов. Окрашивает цитоплазму клеток и волокна межклеточного вещества в срезах (парафиновых, криостатных, вибрoтомных, изготовленных на замораживающем микротоме) и цитологических препаратах. Реагент предназначен для использования в качестве цитоплазматического красителя после окраски гематоксилином [5]. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

ГЛАВА 3. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА И МЕТАБОЛИЗМА КЛЕТОК И ТКАНЕЙ 

3.1. ГИСТО - И ИМУННОЦИТОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ 

      В их основе лежит применение химических реакций для выявления распределения химических веществ в структурах клеток, тканей и органов.       Современные гистохимические методы позволяют обнаруживать аминокислоты, белки, нуклеиновые кислоты, различные виды углеводов, липидов и др.

      Для выявления специфических белков используют иммуноцитохимические реакции. Для этого получают специфические сыворотки, содержащие антитела (например, против белка микротрубочек — тубулина). Далее химическим путем соединяют эти антитела с флюорохромом (или другим маркером). Если меченые антитела нанести на гистологический срез, они вступают в соединение с соответствующими белками клетки и возникает специфическое свечение, видимое в люминесцентном микроскопе. Современные иммуноцитохимические методы, помимо флюорохромов, используют другие самые разнообразные специфические маркеры, позволяющие качественно и количественно оценивать содержание в клетке исследуемых соединений. Модификацией рассматриваемого метода является введение меченых антител в цитоплазму живых клеток с помощью микроманипуляторов.

      Метод культуры клеток, тканей заключается в выращивании клеток и тканей вне организма в искусственных питательных средах (в условиях in vitro). Для получения изолированных клеток производят предварительную обработку материала ферментами трипсином или коллагеназой. Метод позволяет изучать реакции клеток на различные воздействия, механизмы регуляции пролиферации, дифференцировки и гибели. Особенно важное значение данный метод имеет для эмбриологических и цитофизиологических исследований, а также для трансплантации эмбриональных клеток при лечении врожденных и приобретенных дефектов обмена веществ. 

3.2 МЕТОДЫ  ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА. ПРИМЕНЕНИЕ АНТИТЕЛ 

      Антитела - защитные белки, вырабатываемые плазмоцидами (производными В-лимфоцитов) в ответ на действие чужеродных веществ (антигенов). Количество различных форм антител достигает миллиона. Каждое антитело имеет участки для «узнавания» молекул, вызвавших синтез этого антитела.

      В связи с высокой специфичностью антител в отношении антигенов они могут быть использованы для выявления любых белков клетки. Для выявления локализации белков антитела окрашивают флюоресцирующими красителями, а затем клетки изучают с помощью флюоресцентной микроскопии. Антитела можно использовать также для изучения антигенов на ультраструктурном уровне с помощью электронного микроскопа. Для этого антитела метят электронно-плотными частицами (микросферы коллоидного золота).

      Для усиления специфичности реакции применяют моноклональные антитела, образуемые линией клеток, — клонами, полученной методом гибридом из одной клетки. Метод гибридом позволяет получать моноклональные антитела с одинаковой специфичностью и в неограниченных количествах.

       Методы иммунофлюоресцентного анализа широко и эффективно используются в современной гистологии. Эти методы применяются для изучения процессов дифференцировки клеток, выявления в них специфических химических соединений и структур. Они основаны на реакциях антиген — антитело. Каждая клетка организма имеет специфический антигенный состав, который главным образом определяется белками. Продукты реакции можно окрашивать и выявлять в люминесцентном микроскопе, например выявление актина и тубулина в клетке с помощью метода иммунофлюоресцентного анализа.

      Современные методы исследований позволяют проводить анализ химического состава различных структурных компонентов клеток, как фиксированных, так и живых. Изучение отдельных внутриклеточных структур стало возможным после разработки технологий фракционирования клеточного содержимого. 

3.3 МЕТОД  РАДИОАВТОГРАФИИ 

      Важный информативный метод, позволяющий изучать распределение в клетках и тканях веществ, в состав которых искусственно введены радиоактивные изотопы (3Н, НС, 32Р и др.). Введенный в организм животного (или в среду культивирования клеток) изотоп включается в соответствующие структуры (например, меченый тимидин — в ядра клеток, синтезирующих ДНК).

      Метод основан на способности включенных в клетки изотопов восстанавливать бромистое серебро фотоэмульсии, которой покрывают срезы ткани или клетки. Образующиеся после проявления фотоэмульсии зерна серебра (треки) служат своего рода автографами, по локализации которых судят о включении в клетку примененных веществ. Применение меченных тритием предшественников нуклеиновых кислот (тимидина, аденина, цитидина, уридина) позволило выяснить многие важные аспекты синтеза ДНК, РНК и клеточных белков

      Метод радиоавтографии — один из наиболее адекватных современных методов анализа структурно-биохимической организации тканевых структур. По сравнению с биохимическими методами, в которых также используются радиоактивные предшественники, метод радиоавтографии отличается особым способом регистрации включения маркеров в макромолекулы. При биохимических исследованиях специальными счетчиками регистрируется интенсивность включения меченых предшественников в отдельных фракциях, полученных путем дифференциального центрифугирования предварительно измельченных и, следовательно, разрушенных тканевых элементов.