Прокариотная клетка. Особенности строения прокариотной клетки

Кроме пептидогликана в состав клеточных стенок грамположительных эубактерий входит другой уникальный класс химических соединений -- тейхоевые кислоты, представляющие собой полимеры, построенные на основе рибита (пятиатомного спирта) или глицерина (трехатомного спирта), остатки которых соединены между собой фосфодиэфирными связями (рис. 6). Некоторые свободные гидроксильные группы в молекулах спиртов могут быть замещены остатками D-аланина, глюкозы, N-ацетилглюкозамина и некоторых других сахаров.

Тейхоевые кислоты ковалентно могут соединяться с N-ацетилмурамовой кислотой (см. рис. 4). Поскольку это длинные линейные молекулы, они могут пронизывать весь пептидогликановый слой, достигая внешней поверхности клеточной стенки. В этом случае, вероятно, они являются основными антигенами грамположительных эубактерий. Остающиеся свободные гидроксилы фосфорной кислоты придают тейхоевой кислоте свойства полианиона. Как полианионы тейхоевые кислоты определяют поверхностный заряд клетки. Сахарные компоненты тейхоевых кислот входят в состав рецепторов для некоторых бактериофагов и определяют возможность адсорбции фага на клеточной поверхности.

Рис. 6 Структурная формула  глицеринтейхоевой кислоты

Содержит чередующиеся остатки D-аланина и N-ацетилглюкозамина (по Rose, 1971).

В составе клеточной стенки грамположительных эубактерий в небольших количествах также найдены полисахариды, белки и липиды. Для полисахаридов и липидов показана возможность ковалентного связывания с макромолекулами клеточной стенки, в отличие от белков, которые (у тех видов, где имеются) формируют на ее внешней поверхности отдельный слой.

Таким образом, основными  компонентами клеточной стенки грамположительных  эубактерий являются три типа макромолекул: пептидогликаны, тейхоевые кислоты и полисахариды, которые с помощью ковалентных связей образуют сложную структуру с весьма упорядоченной пространственной организацией.

Клеточная стенка бацилл, например Bacillus subtilis, приблизительно соответствует толщине 40 молекул пептидогликана. В целом клеточную стенку грамположительных эубактерий можно представить в виде губчатой структуры с порами диаметром примерно 1 - 6 нм. Возможность прохождения молекул через такую клеточную стенку определяется ее зарядом и размером пор.

Клеточная стенка грамотрицательных эубактерий. У грамотрицательных эубактерий строение клеточной стенки намного сложнее, чем у грамположительных (см. рис. 3). В ее состав входит гораздо большее число макромолекул разного химического типа (см. табл. 1).

Таблица 1/3

Химический состав клеточных  стенок грамположительных и грамотрицательных  эубактерий (по Rose, 1971; Freer, Salton, 1971)

Компоненты клеточной  стенки	Грамположительные эубактерии	Грамотрицательные эубактерии
		внутренний слой (пептидогл-ый)	внешний слой (наружная клеточная  мембрана)
Пептидогликан	+	+	-
Тейхоевые кислоты	+	-	-
Полисахариды	+	-	+
Белки	±	-	+
Липиды	±	-	+
Липополисахариды	-	-	+
Липопротеины	-	±	+

обозначения: (-) -- отсутствуют, (+) -- присутствуют, (±) -- присутствуют не у всех видов

Пептидогликан образует только внутренний слой клеточной стенки, неплотно прилегая к ЦПМ. Для разных видов грамотрицательных эубактерий содержание этого гетерополимера колеблется в широких пределах. У большинства видов он образует одно- или двухслойную структуру, характеризующуюся весьма редкими поперечными связями между гетерополимерными цепями (рис. 7).

Рис. 7 Однослойная структура  пептидогликана

Линиями обозначены гетерополимерные цепочки, образованные чередующимися остатками N-ацетилглюкозамина (Г) и N-ацетилмурамовой кислоты (М), соединенными между собой b-1,4-гликозидными связями. Кружочками обозначены аминокислоты пептидного хвоста.

Химическая структура  пептидогликана грамотрицательных эубактерий в основном сходна со структурой типичного пептидогликана грамположительных эубактерий (см. рис. 4; 5, А).

Снаружи от пептидогликана располагается дополнительный слой клеточной стенки -- наружная мембрана. Она состоит из фосфолипидов, типичных для элементарных мембран, белков, липопротеина и липополисахарида (рис. 8, А). Специфическим компонентом наружной мембраны является липополисахарид сложного молекулярного строения, занимающий около 30 - 40 % ее поверхности и локализованный во внешнем слое (рис. 8, 5).

 

Рис. 8

А. Клеточная стенка грамотрицательных эубактерий:

1 -- цитоплазматическая мембрана; 2 -- пептидогликановый слой; 3 -- периплазматическое пространство; 4 -- молекулы белков (заштрихована гидрофобная часть); 5 -- фосфолипид; 6 -- липополисахарид.

Б. Строение молекулы липополисахарида:

1 -- липид А; 2 -- внутреннее полисахаридное ядро; 3 -- наружное полисахаридное ядро; 4 -- О-антиген.

Белки наружной мембраны можно  разделить на основные и минорные. Основные белки представлены небольшим числом различных видов, но составляют почти 80 % всех белков наружной мембраны. Одна из функций этих белков -- формирование в мембране гидрофильных пор диаметром примерно 1 нм, через которые осуществляется неспецифическая диффузия молекул с массой до 600 - 900 Да⁷ (⁷Да -- дальтон, или единица атомной массы, равен 1,66033 x 10^-27 кг).

Это означает, что через  такие поры могут проходить сахара, аминокислоты, небольшие олигосахариды  и пептиды. Белки, пронизывающие  наружную мембрану насквозь и образующие гидрофильные поры, называют поринами.

Минорные белки наружной мембраны представлены гораздо большим числом видов. Их основная функция -- транспортная и рецепторная. Примером минорных белков могут служить белки, ответственные за специфический транспорт в клетку железосодержащих соединений.

Помимо слоев клеточной  стенки, типичных для большинства  грамотрицательных эубактерий, у некоторых представителей этой группы обнаружены дополнительные слои разной электронной плотности, располагающиеся с внешней стороны от наружной клеточной мембраны. Однако до настоящего времени не ясно, относятся ли они к клеточной стенке, являясь результатом ее последующего усложнения, или же представляют собой структурные элементы многослойного чехла.

Необычные клеточные стенки прокариот

Некоторые скользящие бактерии (миксобактерии, флексибактерии) способны в процессе перемещения по твердому субстрату периодически менять форму клеток, например, путем изгибания, что говорит об эластичности их клеточной стенки, и в первую очередь ее пептидогликанового слоя. Электронно-микроскопическое изучение, однако, обнаружило у них клеточную стенку, типичную для грамотрицательных эубактерий. Наиболее вероятное объяснение гибкости клеточной стенки этих бактерий -- чрезвычайно низкая сшитость ее пептидогликанового компонента.

Наконец, обнаружены прокариоты, клеточная стенка которых по структуре  и химическому составу резко  отличается от описанных выше типов. Они принадлежат к группе архебактерий.

Клеточные стенки метанобразующих архебактерий содержат пептидогликан особого химического строения. У других представителей этой группы клеточная стенка состоит исключительно из кислого гетерополисахарида, а у некоторых экстремально галофильных, метанобразующих и ацидотермофильных архебактерий -- только из белка.

Архебактерии с клеточной стенкой белковой природы не окрашиваются по Граму, остальные типы архебактериальной клеточной стенки дают грамположительную реакцию.

 

Прокариоты без клеточной  стенки

При воздействии определенными  химическими веществами оказалось  возможным получать в лаборатории  из разных видов эубактерий формы с частично (сферопласты) или полностью (протопласты) отсутствующей клеточной стенкой.

Впервые это обнаружили при  действии на бактериальные клетки лизоцимом, ферментом из группы гликозидаз, содержащимся в яичном белке, слезной жидкости и выделяемом некоторыми бактериями. Лизоцим разрывает b-1,4-гликозидные связи в гетерополисахаридной цепи (см. рис. 4), что в конечном итоге может привести к полному удалению пептидогликана из клеточной стенки. Полученные под действием лизоцима сферопласты (из грамотрицательных эубактерий) или протопласты (из грамположительных) принимают сферическую форму и очень чувствительны к внешнему осмотическому давлению. Существовать они могут только в условиях, когда осмотическое давление питательной среды сбалансировано с осмотическим давлением внутри клетки. В благоприятных условиях сферопласты и протопласты проявляют определенную метаболическую активность, но утрачивают способность к размножению.

Прокариоты, не содержащие клеточной  стенки, обнаружены и в природе. Это  группа микоплазм, сапрофитов и внутриклеточных  паразитов растений, животных и человека. Формы, сходные с микоплазмами, были получены также опытным путем  с помощью пенициллина, лизоцима и других факторов. Это так называемые L-формы. В благоприятных условиях они обладают метаболической активностью и способностью к размножению. Предполагают, что микоплазмы произошли в результате мутации, нарушившей синтез веществ клеточной стенки, от обычных бактериальных форм аналогично тому, как в экспериментальных условиях получают генетически стабильные L-формы.

Уникальность химического  состава клеточной стенки прокариот, ее отличие от таковой эукариот сделали  возможным создание и применение лекарственных препаратов, специфически действующих только на прокариотную клеточную стенку. На этом основано действие пенициллина и некоторых других антибиотиков, подавляющих разные этапы синтеза пептидогликана. Пенициллин, например, ингибирует образование связей между пептидными хвостами на этапе "сшивания" полимера, происходящего в клеточной стенке в процессе роста прокариотной клетки (см. рис. 5).

Функции клеточной стенки прокариот

Клеточная стенка прокариот  выполняет разнообразные функции: механически защищает клетку от воздействий  окружающей среды, обеспечивает поддержание  ее внешней формы, дает возможность  клетке существовать в гипотонических растворах. В первую очередь в  этом «заслуга» пептидогликана.

Структурная дифференцировка  клеточной стенки у грамотрицательных  эубактерий, приведшая к формированию дополнительного слоя в виде наружной мембраны, значительно расширила круг функций клеточной стенки.

Прежде всего, это связано  с проблемами проницаемости и  транспорта веществ в клетку. Наружная мембрана имеет специфические и неспецифические каналы (поры) для пассивного транспорта веществ и ионов, необходимых клетке, т. е. осуществляет функции молекулярного "сита". Наружная мембрана также препятствует проникновению в клетку токсических веществ, что находит отражение в большей устойчивости грамотрицательных эубактерий (сравнительно с грамположительными) к действию некоторых ядов, химических веществ, ферментов и антибиотиков.

Появление у грамотрицательных эубактерий дополнительной мембраны в составе клеточной стенки фактически привело к созданию обособленной полости (периплазматического пространства), отграниченной от цитоплазмы и внешней среды специфическими мембранами и несущей важную функциональную нагрузку.

Периплазматическое пространство, куда погружен пептидогликановый слой, заполнено раствором, в состав которого входят специфические белки, олигосахариды и неорганические молекулы.

Периплазматические белки представлены двумя типами: транспортными белками и гидролитическими ферментами. Транспортные белки -- это переносчики, связывающиеся с соответствующими субстратами внешней среды и транспортирующие их от наружной мембраны к цитоплазматической.

Было обнаружено также, что  многие бактерии способны в больших  количествах вырабатывать ферменты (гликозидазы, протеазы, липазы и др.), гидролизующие все типы полимерных молекул. Последними могут быть как молекулы, синтезируемые самой клеткой, так и чужеродные, попавшие в клетку извне. Отрицательные последствия гидролиза собственных молекул (самопереваривание) очевидны. В то же время прокариоты нуждаются в гидролитических ферментах, так как это расширяет круг используемых ими веществ, включая в него полимеры разного типа. Становится понятна необходимость изолирования этих ферментов от цитоплазматического содержимого. Грамположительные эубактерий выделяют гидролитические ферменты во внешнюю среду, у грамотрицательных -- они локализованы в периплазматическом пространстве.

Разнообразные функции выполняют  макромолекулы, локализованные частично или полностью на внешней стороне  клеточной стенки, контактирующей с  окружающей средой; это специфические  рецепторы для фагов и колицинов; антигены (липополисахарид грамотрицательных эубактерий, тейхоевые кислоты грамположительных); макромолекулы, обеспечивающие межклеточные взаимодействия при конъюгации, а также между патогенными бактериями и тканями высших организмов.

 

Капсулы, слизистые слои и чехлы 

Снаружи клеточная стенка прокариот часто бывает окружена слизистым веществом. Такие образования  в зависимости от структурных  особенностей получили название капсул, слизистых слоев или чехлов. Все  они являются результатом биосинтеза прокариотами органических полимеров  и отложения их вокруг клеток.

Под капсулой понимают слизистое  образование, обволакивающее клетку, сохраняющее  связь с клеточной стенкой  и имеющее аморфное строение (см. рис. 1, 19; 2, 2). Если толщина образования  меньше 0,2 мкм и, следовательно, оно  может быть обнаружено только с помощью  электронного микроскопа, говорят о  микрокапсуле. Если больше 0,2 мкм, говорят  о макрокапсуле. Последнюю можно видеть в обычный световой микроскоп. Для этого препарат просматривают в капле туши, которая не в состоянии проникнуть в капсулу. На темном фоне выделяются клетки, окруженные светлыми зонами. Если же слизистое вещество имеет аморфный, бесструктурный вид и легко отделяется от поверхности прокариотной клетки, говорят о слизистых слоях, окружающих клетку (см. рис. 2; 3).

В отличие от капсул чехлы  имеют тонкую структуру. Нередко  в них обнаруживают несколько  слоев с разным строением (см. рис. 2; 4). Чехлы ряда бактерий, метаболизм которых связан с окислением восстановленных  соединений металлов, часто инкрустированы их окислами. Между этими структурами  у прокариот обнаружено много переходных форм, так что иногда нельзя четко отграничивать капсулу от слизистых клеточных выделений или капсулу от чехла.

Наличие капсулы зависит  от штамма микроорганизма и условий  его культивирования. Бактерии, образующие капсулу, могут легко в результате мутации превращаться в бескапсульные формы, что не приводит к какому-либо нарушению клеточной активности, поэтому капсулы нельзя рассматривать как обязательный структурный компонент прокариотной клетки.

Капсулы, слизистые образования  и чехлы могут содержать компоненты, одинаковые с клеточной стенкой, однако их химические составы не идентичны. Как правило, химический состав капсул, образуемых бактериями, родо- или видоспецифичен. Основные химические компоненты большинства капсул прокариот -- полисахариды гомо- или гетерополимерной природы. Исключение составляет капсула некоторых видов Bacillus, построенная из полипептида, являющегося полимером D-глутаминовой кислоты. Для ряда бактерий показана способность синтезировать и выделять в окружающую среду волокна целлюлозы.