Для получения достоверного результата рекомендуется просматривать многие поля зрения препарата. Результат считается  положительным в том случае, если препарат содержит клетки эпителия и  удается обнаружить не менее 6 элементарных телец, имеющих все вышеперечисленные  признаки.

     Обнаружение меньшего количества возбудителя делает результат сомнительным и требует  повторного исследования, желательно на фоне провокации (пищевая - алкоголь, медикаментозная - инъекция пирогенала, механическая - массаж уретры на буже). Контроль излеченности следует проводить  не ранее чем через две недели, так как возможно сохранение не элиминированного антигенного материала нежизнеспособного  возбудителя, что будет давать ложноположительные результаты. Получение 3 отрицательных  результатов исследования у мужчин в течение месяца и у женщин в течение 3 менструальных циклов, отсутствие клинических проявлений хламидийной инфекции свидетельствует о выздоровлении.

     РИФ при правильной подготовке пациента, соблюдении правил взятия материала  и постановки реакции является высокочувствительным и специфичным методом диагностики  урогенитального хламидиоза и позволяет  выявлять возбудителя у 90 - 95% больных. Данный метод относительно дешев, прост в выполнении, высокоинформативен, не требует специального дорогостоящего оборудования, позволяет быстро получить результат (0.5 - 1 час) и визуально контролировать качество взятия материала для исследования.

     Методы, использующие принципы молекулярной биологии

     В группу входят методы ДНК-зондов и полимеразной цепной реакции (ПЦР), которые позволяют  выявить генетический материал возбудителя  в исследуемом биоматериале. Наборы для диагностики хламидиоза ДНК-зондами  находятся пока на стадии разработки и клинических испытаний.

     ПЦР активно внедряется в практику лабораторной диагностики. Метод основан на выделении  специфической последовательности ДНК или РНК возбудителя при  помощи комплементарных праймеров, последующего ее многократного копирования  и накопления для дальнейшего  выявления обычными методами детекции (электрофорез или ИФА). Данный метод  обладает высокой специфичностью и  чувствительностью, практически приближающейся к культуральному и позволяет  обнаружить единичных возбудителей в исследуемом материале. Метод  ПЦР требует специального дорогостоящего оборудования, отдельной специально оснащенной лаборатории, соответствующей  подготовки и высокой квалификации медицинского персонала. Вместе с тем, отсутствие сертификации используемых в России праймеров и достаточного опыта применения метода ПЦР, специфичность  исследуемого материала, частая его  контаминация сопутствующей микрофлорой (что может давать ложноположительные результаты) не позволяет однозначно судить о его ценности при диагностике урогенитального хламидиоза.

     Таким образом, в настоящее время наиболее доступным, простым и в то же время  высокоинформативным методом диагностики  урогенитального хламидиоза и установления излеченности является реакция прямой иммунофлюоресценции (РИФ). Контроль за динамикой течения заболевания  и эффективностью лечения следует  проводить, определяя титр антихламидийных  антител в сыворотке крови  методом иммуноферментного анализа (ИФА).

4 Урогенитальный трихомониаз

     Урогенитальный  трихомониаз – широко распространенное инфекционное воспалительное заболевание, передаваемое преимущественно половым  путем, вызывается простейшими Trichomonas vaginalis.

     Трихомонады являются жгутиковыми эукариотами  и относятся к простейшим из класса Flagellata, семейства Trichomonadida, рода Trichomonas. В человеческом организме паразитируют 3 вида трихомонад: Trichomonas intestinalis - кишечная трихомонада, Trichomonas elongata (tenax, buccalis) - ротовая  трихомонада и Trichomonas vaginalis - влагалищная  трихомонада. Только Tr. vaginalis поражает урогенитальный тракт и является патогенной для человека, вызывая  воспалительные заболевания: уретрит, простатит, эндоцервицит, вагинит, бартолинит и т.д.

     Биологические свойства Tr. vaginalis

     Влагалищные трихомонады являются одноклеточными простейшими. Форма их вариабельна, чаще грушевидная - в нативных препаратах (висячая капля), но наряду с этим могут наблюдаться овальные, шарообразные, несколько удлиненные - веретенообразной формы. Длина тела влагалищной трихомонады  колеблется от 5 до 30 мкм, ширина – 5 - 8 мкм. Она покрыта оболочкой - пелликулой. Тело влагалищной трихомонады состоит из цитоплазмы, ядра, парабазального тела, блефаропласта, ризопласта, аксостиля, ундулирующей мембраны, краевой и парабазальной фибриллы и жгутиков. Цитоплазма состоит из тонкозернистой массы. Ядро продолговато-овальной формы, расположено в передней трети тела. Впереди ядра, на переднем конце тела трихомонады, находится блефоропласт, от которого берут начало направляющиеся вперед 4 свободных жгутика. Они выполняют роль органоидов движения и принимают участие в захватывании пищи. Обнаружение жгутиков при просмотре нативных препаратов служит дифференциально-диагностическим признаком влагалищных трихомонад от других элементов материала (лейкоциты, эпителиальные клетки). Степень подвижности жгутиков отражает биологическую активность возбудителя. В окрашенных препаратах жгутики трудно различимы, что обусловлено их хрупкостью и повреждением при фиксации и окраске препарата.

     Влагалищные трихомонады размножаются делением, как простым продольным делением на две части, так и множественным. Полный цикл деления занимает от 0.5 до 1.5 - 3 часов. Перед делением движение трихомонады замедляется, разделяется блефаробласт и жгутики, число которых удваивается. Далее делится ядро, дочерние ядра расходятся к противоположным полюсам. После перешнуровки цитоплазмы образуются две новые особи.

     Трихомонады являются факультативными анаэробами. Оптимум роста наблюдается при  +37°С. Они легко культивируются в питательных средах в присутствии или отсутствии других микроорганизмов.

     Встречаются штаммы влагалищных трихомонад, которые  авирулентны для их носителей  и не вызывают у них видимых  клинических реакций со стороны  слизистых мочеполовых органов. Однако, при передаче их в процессе полового акта партнеру с переменой  условий обитания они становятся патогенными и вызывают развитие воспалительного процесса в слизистой  мочеполовых органов. Возможен переход  асимптомной формы трихомониаза в манифестную при нарушении  равновесия между макроорганизмом и влагалищной трихомонадой вследствие изменения реактивности организма, происходящим при инфекционных заболеваниях, переохлаждении, переутомлении, изменении гормонального статуса, при действии нервно-психических травм и других стрессорных факторов, приводящих к снижению как местной, так и общей иммуннорезистентности.

     Инвазия влагалищной трихомонады способствует переходу постоянных сапрофитов уретры и влагалища у здоровых лиц  в вирулентное состояние, что  ведет к усилению токсигенного воздействия  на ткани органов урогенитального  тракта. В результате этого развивается  смешанный трихомонадно-бактериальный  воспалительный процесс, в котором  первичным этиологическим агентом  является Tr. vaginalis.

     Вагинальные трихомонады способны фагоцитировать бактерии и другие частицы, которые  затем перевариваются. Однако возможна персистенция бактерий (гонококков) внутри трихомонады, что способствует их длительному  существованию в организме в  скрытом, недоступном для антибактериальной  терапии состоянии.

     Влагалищные трихомонады могут сохранять  жизнеспособность в неразведенных  выделениях или в культурах, разведенных  физиологическим раствором, или  в других солевых растворах в  течение нескольких часов, однако они  плохо переносят гипотонические растворы, а высушивание и температура  свыше 45°С убивает их мгновенно.

     4.2 Лабораторная диагностика

     Для обнаружения Tr. vaginalis используют следующие основные методы:

     1. Микроскопия нативных препаратов;

     2. Микроскопия окрашенных препаратов;

     3. Культуральный метод;

     4. Иммунологический метод.

     4.2.1 Микроскопия нативных препаратов

     При микроскопии нативных препаратов, возбудителя  обнаруживают по его специфическому движению среди клеточных элементов  и микроорганизмов в препарате, приготовленном непосредственно перед  исследованием. Просмотр влагалищной  трихомонады в нативных препаратах проводят методом раздавленной капли - “капли-суспензии” и реже методом  “висячей” капли.

     При приготовлении препарата “капли-суспензии” на сухое, обезжиренное и предварительно прогретое до 37°С предметное стекло наносят каплю теплого физиологического раствора хлорида натрия и смешивают  в нем исследуемое отделяемое из очага заболевания (теплый физиологический  раствор активирует влагалищную  трихомонаду и увеличивает ее подвижность). Взвесь накрывают покровным  стеклом, избегая образования воздушных  пузырьков в препарате. Избыток  жидкости, вышедшей за границы покровного стекла удаляют фильтровальной бумагой. Смывы со слизистой уретры, влагалища  и негустые осадки центрифугатов, полученных на физиологическом растворе, а также  культуры трихомонад, выделенные на жидких средах исследуются в нативных препаратах без дополнительного разведения.

     При приготовлении препарата “висячая капля” на середину покровного стекла, края которого предварительно смазываются  вазелином, наносится теплый (37 - 38°С) физиологический раствор, к которому добавляется исследуемый материал, осторожно перемешивается. Покровное стекло переворачивают и накладывают каплей вниз над лункой специального предметного стекла для просмотра “висячей капли”. Капля должна свободно свисать в углублении предметного стекла, не соприкасаясь с его краями и дном.

     Ввиду того, что при длительном пребывании препаратов при комнатной температуре  трихомонады теряют подвижность, исследование следует проводить возможно быстрее  после получения материала (в  течение не более 1 часа).

     Исследование  нативных препаратов проводят под микроскопом  с естественным или искусственным  освещением немедленно после его  приготовления при общем увеличении 280 - 400 раз (объектив 40, окуляр 7 или 10). Влагалищная трихомонада определяется по грушевидной, округлой или овальной форме тела по размерам близким к лейкоцитам. Она имеет характерные толчкообразные движения ундулирующей мембраны и жгутиков, которые особенно хорошо видны при исследовании в микроскопе с темнопольным или фазовоконтрастным конденсором. Трихомонады совершают активные движения поступательного и вращательного характера.

     При исследовании нативных препаратов влагалищные  трихомонады трудно отличимы от жгутиковых семейства бодонидов, которые могут  быть занесены в препарат из воды, загрязненной посуды и т.д. В отличие от трихомонад, бодониды имеют 2 жгутика и быстро двигаются по прямой. К ошибкам  может привести наличие в препарате  подвижных бактерий, которые, прикрепляясь к лейкоцитам, создают впечатление  большого количества подвижных трихомонад.

     Метод нативных препаратов высоко специфичен. Однако обнаружить в них влагалищные  трихомонады можно лишь при наличии  жизнеспособного возбудителя с  активной подвижностью, что достигается  технически правильным взятием материала  и своевременным его просмотром. Чувствительность метода снижена при  бессимптомном течении заболевания. Измененные формы трихомонад, неподвижные  особи редко выявляются данным методом.

     Микроскопия окрашенных препаратов

     Для выявления влагалищных трихомонад мазки с материалом после фиксации возможно окрашивать различными способами, как простыми - окрашивание одним  красителем, так и сложными - окрашивание  несколькими красителями. После  окрашивания мазки микроскопируют с использованием иммерсионной системы  микроскопа и общим увеличением 500 - 1000 раз. Материал берут из очагов поражения при помощи стерильного зонда и наносят на чистое обезжиренное предметное стекло равномерным тонким слоем. После высушивания на воздухе, препараты фиксируют в течение 3 - 5 минут в метиловом спирте, или этиловом 96% спирте, или в смеси Никифорова. Наиболее часто используют следующие способы окраски:

     1. Окрашивание по Романовскому-Гимзе.  Фиксированный препарат помещают  в рабочий раствор краски (исходный  раствор краски разведенный дистиллированной  водой в соотношении 1:10) на 25 - 60 минут, затем его промывают водой, высушивают и микроскопируют с использованием иммерсионной системы. Ядра трихомонад окрашиваются в фиолетовый или фиолетово-рубиновый цвет, протоплазма - в голубой, блефаропласт, жгутики, аксостиль и хроматиновые зерна протоплазмы окрашиваются в розовый или красный цвет;

     2. Окрашивание 1% водным раствором  метиленового синего (1 г метиленового  синего растворяют в 100 мл дистиллированной  воды, фильтруют через бумажный  фильтр). На препарат наносят 1% раствор метиленового синего  на 1 минуту, затем тщательно смывают  оставшийся краситель под струей  холодной воды, высушивают и микроскопируют. Препарат синего цвета. Бактериальная  флора прокрашивается в синий  цвет разной интенсивности. Влагалищные  трихомонады различной формы  расположены в слизи, между  клеточными элементами - четко просматривается  оболочка, ядро расположено эксцентрично, интенсивно окрашено в синий  цвет, протоплазма нежная, сетчатая, светло-синяя, вакуоли бесцветны.