Алгоритми виконання практичних навичок з навчальної дисципліни «Мікробіології»

Мета:

Ознайомитися з роботою  бактеріологічної (мікробіологічної) лабораторії, яка спрямована на ранню і цілеспрямовану діагностику інфекційних захворювань, організацією робочого місця лаборанта, правилами поведінки та техніки безпеки в мікробіологічній лабораторії.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Завдання медичної мікробіологічної лабораторії:

1) Діагностичні дослідження при інфекційних хворобах.

2) Профілактичне обстеження для виявлення носіїв патогенних мікроорганізмів.

3) Санітарно-мікробіологічний контроль об’єктів навколишнього середовища.

4) Наукові дослідження з метою вдосконалення методів мікробіологічної діагностики, створення ефективних препаратів для профілактики і лікування інфекційних хвороб.

ОСНАЩЕННЯ:

- термостат, холодильник,  паровий і повітряний стерилізатори, дистилятор;

- нагрівальні прилади,  мікроскопи;

- бактеріальні петлі,  предметні та покривні скельця,  вата, пінцет;

- сухий спирт, сірники,  спиртівка, олівець по склу, гумові груші;

- 70% етиловий спирт,  ізотонічний розчин натрія хлориду;

- імерсійна олія, лабораторний посуд, штативи;

- барвники, поживні середовища;

- дезінфекційний розчин;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Ознайомтесь із структурою мікробіологічної лабораторії:

- лабораторна кімната

- бокс

- стерилізаційна

- термостатна

- мийка

- реєстраційна

Мікробіологічні лабораторії  в ЛПЗ проводять дослідження  для діагностики інфекційних хвороб.

В боксах проводять дослідження  в стерильних умовах

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Ознайомтесь з організацією робочого місця:

- спиртівка, сухий спирт, сірники

- бактеріальна петля

- предметне покривне  скло

- пінцет, ножиці, олівець  по склу

- склянка з ватою,  дезрозчином для піпеток і  скла

- гумові груші

- 70% етиловий спирт

На робочому столі  знаходяться тільки предмети необхідні  для проведення бактеріологічних досліджень.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

- ізотонічний розчин  натрію хлориду

- мікроскоп, імерсійна  олія

- лабораторний посуд

2. Вивчить правила поведінки та техніки безпеки, поставте свій підпис в журналі інструктажу з питань техніки безпеки.

3. Вивчить загальні вимоги до взяття і транспортування матеріалу до лабораторії:

- взяття матеріалу  слід здійснювати до вживання  антибіотиків та інших препаратів;

- дотримування правил  асептики

- характер і кількість  матеріалу, який збирається, повинен бути скоригований;

- строки з моменту  взяття матеріалу та його доставки у лабораторію не більше ніж 2-3 години;

- транспортують матеріал  на спеціальному транспорті - в біксах, сумках-холодильниках, контейнерах;

- направлення на дослідження  упаковують окремо.

В направлені вказують:

- заклад (назва)

- відділення

- прізвище, ім’я та  по батькові, вік хворого

- діагноз, дата захворювання

- матеріал для дослідження,  дату і час взяття матеріалу

- мету дослідження

- прізвище і посаду  особи, яка направляє матеріал в лабораторію.

4. Ознайомтесь з принципами основних методів мікробіологічних досліджень:

- мікроскопічний

- мікробіологічний

- серологічний

- біологічний

- молекулярно-генетичний

- алергійний

Профілактика зараження  персоналу. Запобігання потраплянню патогенних мікроорганізмів у навколишнє середовище.

Патологічний матеріал відбирають стерильним інструментом (тампоном, шпателем, піпеткою, та ін.) і вміщують в стерильний посуд (банки, пробірки, флакони, плювальниці).

Забороняється обгортати  направлення навколо посудини з об’єктом дослідження.

До кожної проби додають  етикетку.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Проведіть дезінфекцію рук, робочого місця.

Забезпечується інфекційна безпека.

Мета:

Виготовлення мазків з мікробної культури, що виросла на щільному живильному середовищі.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Для вивчення морфологічних  властивостей мікроорганізмів 
(форми, розташування тинкторіальних властивостей).

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскоп, імерсійна  олія;

- агарова культура;

- 0,9% розчин хлориду  натрію;

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- предметні скельця;

- бактеріологічна петля;

- олівець по склу;

- пісочний годинник;

- пінцет;

- барвники: папірці за  Синьовим, розчин Люголя, фуксин 
Прейффера;

- 96% етиловий спирт;

- фільтруючий папір;

- лоток для фарбування;

- вата;

- дезінфікуючий розчин;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Підготуйте робоче місце.

3. Візьміть знежирене предметне скельце. Підпишіть зі зворотної сторони номер, який вказаний на пробірці з культурою.

4. Пропаліть у полум’ї спиртівки скельце і після охолодження покладіть на половинку чашки Петрі.

Забезпечується стерильність скельця.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Бактеріологічну петлю, тримаючи як олівець, вертикально у правій руці, пропаліть у полум’ї – спочатку кінець петлі, потім її металеву частину.

2. Не випускаючи петлі, лівою рукою візьміть пробірку (флакон) з 0,9% розчином хлориду натрію, затисніть ватно-марлеву пробку 4-им і 5-им пальцями правої руки, витягніть її, і пронесіть край пробірки через полум’я спиртівки.

3. Тримайте пробірку на відстані 10см від полум’я, не випускаючи пробки.

4. Введіть бактеріологічну петлю у пробірку, охолодіть її, торкаючись стінок пробірки. Наберіть краплю фізіологічного розчину.

Стерилізація петлі.

Забезпечується стерильність.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

5. Вийміть бактеріологічну петлю. Проведіть край пробірки і пробки через полум’я, закрийте пробірку і поставте у штатив.

6. На центр предметного скельця нанесіть бактеріологічною петлею краплю фізіологічного розчину, щоб вона розтеклася рівномірно.

7. Знову простерилізуйте бактеріологічну петлю у полум’ї спиртівки, візьміть у ліву руку пробірку зі скошеним агаром з культурою (за встановленими правилами).

8. Відкрийте пробірку (п.2), охолодіть петлю і наберіть невелику кількість культури. Вийміть бактеріологічну петлю, не торкаючись стінок пробірки, і закрийте пробірку (п.5).

9. Культуру бактеріологічною петлею нанесіть біля краплі фізіологічного розчину і поступово розтирайте її по склу, емульгуючи в краплі до отримання тонкого, рівномірного мазка округлої чи овальної форми діаметром 1-1,5 см.

10. Зафламбуйте бактеріологічну петлю і поставте у штатив.

11. Препарат висушіть на повітрі.

12. Зафіксуйте препарат у полум’ї спиртівки.

13. Покладіть препарат на підставку над лотком для фарбування.

14. На препарат пінцетом покладіть папірець по Синьову, потім нанесіть 2-3 краплі води на 1-2 хв.

15. Зніміть пінцетом папірець у лоток.

16. Не промиваючи водою, нанесіть на препарат розчин Люголя на 1 хв. Злийте розчин Люголя.

17. На препарат нанесіть 96% етиловий спирт на 30-60 сек.

18. Промийте препарат водопровідною водою до повного зникнення струмочків барвника.

19. На препарат несіть 1-2 краплі фуксину Прейффера на 1-2 хв.

20. Промийте препарат водою.

21. Висушіть препарат фільтрувальним папером.

Забезпечується стерильність

Культура для виготовлення мазка.

Грампозитивні утворюють  міцну сполуку з генціанвіолетом та йодом, яка не вимивається спиртом.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Підготуйте мікроскоп.

2. Проведіть мікроскопію препарату в імерсійній системі.

3. Визначте морфологічні і тинкторіальні властивості мікроорганізмів.

4. Занурте препарат у дезінфікуючий розчин.

5. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

Грамнегативні мікроорганізми фарбуються в червоний колір. Грампозитивні  – в фіолетовий.

Забезпечується інфекційна безпека.

Мета:

Виготовлення мазків з крові для мікроскопічного  дослідження.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Кров для дослідження  відбирають з діагностичною метою, залежно від строків захворювання і вираженості клінічних симптомів. Кров для дослідження відбирають при сепсисі.

Культура бактерій, виділена із крові називається гемокультурою.

Сепсис можуть спричинити будь-які гноєтворні коки й інші мікроорганізми, а в ослабленому організмі й умовно-патогенні, у разі їх проникнення у кров.

ОСНАЩЕННЯ:

- термостат, бікс;

- поживні середовища: ЖСА, КА, СА, цукровий бульон;

- спиртівка, сухий  спирт, сірники, маркер, серветки;

- 70% етиловий спирт,  вата, пінцет, шприц;

- бланки направлень;

- дезрозчини;

- гумові кільця;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Обладнайте робоче місце, проведіть маркірування зразків

3. Оформіть направлення до лабораторії, в якому слід указати:

- назву ЛПЗ;

- відділення, № палати;

- назву матеріалу,  мету дослідження;

- П.І.Б. пацієнта, рік  народження;

- діагноз;

- дату і час взяття  матеріалу;

- прізвище медпрацівника, який проводив забір і посів матеріалу

4. Підпишіть флакон.

Всі пункти направлення  повинні бути заповнені.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Кров на стерильність (гемокультуру) забирають двоє людей.

2. 5-10 мл крові беруть шприцом з ліктьової вени.

3. Запаліть спиртівку.

4. Візьміть в ліву руку флакон з бульоном, відкрийте його мізинцем правої руки (пробку весь час тримайте у руці).

5. Зафламбуйте отвір флакона з бульоном.

6. Кров зі шприцу засійте у рідке поживне середовище - цукровий бульон у співвідношенні 1:10, наприклад 5 мл крові на 45 мл середовища.

Кров відбирають з  перших днів захворювання, біля ліжка  хворого, в асептичних умовах.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

7. Посів проведіть над полум’ям спиртівки.

8. Зафламбуйте отвір флакона, пробку.

9. Після посіву флакон закрийте ватною пробкою, накрийте паперовим ковпачком, скріпіть гумовим кільцем.

10. Перевірте етикетку на флаконі, паспортні дані, супровідну документацію.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Поставте посіви в термостат.

2. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

Забезпечується інфекційна безпека.

МЕТА:

Виготовлення мазків з патологічного матеріалу для  мікроскопічного дослідження.

призначення:

Препарати з патологічного матеріалу для мікроскопічного дослідження після забарвлення за способом Ціля-Нільсена – для виявлення мікобактерій туберкульозу, лепри, актиноміцетів, іншими способами – для визначення наявності мікроорганізмів у дослід-жуваному матеріалі.

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскоп, імерсійна  олія;

- предметні скельця;

- спиртівка, сухий спирт, сірники;

- стерильні пастерівські піпетки;

- дезінфікуючий розчин;

- олівець по склу;

- бактеріологічна петля;

- досліджуваний матеріал;

- барвники;

- 96% розчин етилового  спирту;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2.. Підготуйте робоче місце.

3. Візьміть знежирене предметне скельце. Підпишіть зі зворотної сторони номер, який вказаний на посуді з матеріалом.

4. Пропаліть у полум’ї спиртівки скельце і після охолодження покладіть на половинку чашки Петрі.

Забезпечується стерильність скельця.

ІІ. виконання навички

1. Нанесіть стерильною бактеріологічною петлею або пастерівською піпеткою матеріал, що досліджується (гній, мокротиння), на одне з предметних скелець. Використану піпетку занурте у дезінфекційний розчин.

2. Другим предметним склом покрийте матеріал так, щоб залишилась вільною 1/3 верхнього та нижнього скла. Розсуньте їх у різні сторони таким чином, щоб отримати 2 однакових мазки.

3. Висушіть на повітрі при кімнатній температурі.

4. Зафіксуйте мазок у розчині 96% розчину етилового спирту – 5 хв.

5. Проведіть забарвлення за методом Ціля-Нільсена.

Стерилізація петлі.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

ІІІ. заключний етап

1. Підготуйте мікроскоп.

2. Проведіть мікроскопію препарату в імерсійній системі.

3. Визначте  морфологічні і тинкторіальні  властивості.

4. Занурте препарат у дезінфікуючий розчин.

5. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

Забезпечується інфекційна безпека.