Алгоритми виконання практичних навичок з навчальної дисципліни «Мікробіології»

Мета:

Виявлення мікроорганізмів  в патологічному матеріалі.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Простий метод фарбування передбачає використання одного барвника, частіше це фуксин Прейффера або метиленовий синій. Його використовують тільки для виявлення мікробів у патологічному матеріалі, визначення їх кількості, форми, взаємного розташування.

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскоп, імерсійна  олія;

- патологічний матеріал  культура ешеріхій, стафілокока;

- ізотонічний розчин  натрію хлориду, предметне скло;

- пінцет, бактеріологічна  петля, спиртівка, сухий сирт, сірники;

- маркер, лоток для  фарбування;

- барвники: фуксин Прейффера,  метиленовий синій;

- вода для промивання  препаратів, фільтрувальний папір;

- стерильні чашки Петрі;

- 70% етиловий спирт, Стерилліум;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Обладнайте робоче місце

3. Приготуйте мазки із патологічного матеріалу, культур мікроорганізмів.

4. Зафіксуйте мазки у полум’ї спиртівки.

Виявлення патогенних мікроорганізмів в патологічному матеріалі за допомогою мікроскопа називається мікроскопічним методом лабораторної діагностики.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Фарбування препарату простим методом:

- помістіть препарат на підставку в лоток для 
фарбування;

- нанесіть барвник  піпеткою так щоб, він закрив  весь препарат;

- проконтролюйте термін  дії барвника (фуксин Прейффера  – 1-2 хв., метиленовий синій 3-5 хв.)

- промийте препарат  водою;

- висушіть препарат  фільтрувальним папером.

2. Проведіть мікроскопію забарвлених мазків-препаратів.

Під час простого методу фарбування використовують один барвник.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Проведіть дезінфекцію рук, робочого місця.

Забезпечується інфекційна безпека.

Мета:

Метод Грама називають диференціальним, він дає змогу розрізнити окремі групи бактерій за тинкторіальними властивостями.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Під час фарбування за Грамом бактерії поділяють на дві  групи – грампозитивні (забарвлюються у фіолетовий колір), та грамнегативні (забарвлюються у червоний колір). Здатність бактерій сприймати барвники називають тинкторіальними властивостями мікроорганізмів.

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскоп, імерсійна  олія;

- готові мазки-препарати;

- барвники: карболовий розчин генціанфіолетового або папірці за Синьовим, розчин Люголя, розчин фуксину Прейффера;

- 96% етиловий спирт;

- вода;

- лоток для фарбування;

- пісочний годинник;

- фільтрувальний папір;

- піпетки, пінцет;

- склянка з 0,2% розчином  дезактина;

- гумові рукавички, мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Приготуйте карболовий розчин генціанфіолетового або папірці за Синьовим.

3. Розчин Люголя.

4. 96% етиловий спирт

5. Розчин фуксину Прейффера.

6. Воду

7. Фільтрувальний папір

8. Лоток

9. Пісочний годинник

Метод розроблено Крістіаном Грамом в 1889 році. Метод Грама є найважливішим методом забарвлення мікробів.

Для фарбування беруть розведені 
воднофенолові розчини, які готують із насичених розчинів відповідних барвників.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Фіксований мазок покладіть на спеціальну підставку над лотком.

2. На препарат покладіть клаптик папірця за Синьовим, на який налийте 2-3 краплі води. Фарбуйте препарат 1-2 хв.

3. Зніміть папірець пінцетом в лоток для фарбування.

4. Нанесіть на препарат розчин Люголя (до почорніння) – 1 хв.

5. Нанесіть на препарат 96% етиловий спирт – 30-60 сек.

Принцип методу полягає  в тому що, грампозитивні бактерії здатні утворювати міцну сполуку з генціанфіолетовим та йодом, яка не вимивається з бактерій спиртом, отже вони забарвлюються в темно-фіолетовий колір.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

6. Промийте препарат водою до повного зникнення струмочків барвника.

7. Нанесіть на препарат розчин фуксину 
Прейффера на 1-2 хв.

8. Змийте барвник, ретельно промийте препарат водою.

9. Висушіть препарат фільтрувальним папером.

10. Нанесіть на забарвлений препарат імерсійну олію.

11. Проведіть мікроскопію препарату.

12. Визначте морфологію та тинкторіальні властивості мікроорганізмів.

У грамнегативних бактерій компонент вимивається спиртом, тому вони потім забарвлюються фуксином в 
червоний колір.

Грампозитивні – стафілококи, стрептококи, пневмококи, сарцини, клостридії, а також дифтерійні та туберкульозні палички.

Грамнегативні – гонококи, менінгококи, кишкові па-лички, сальмонели, збудники дизентерії, рикетсії, всі звивисті бактерії та інші.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Після закінчення роботи підніміть тубус, зніміть препарат, занурте його в 0,2% розчин дезактину.

2. Обережно витріть серветкою, змоченою 96% етиловим спиртом, об’єктив, поверніть вбік, опустіть тубус.

3. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

Знижується ризик інфікування.

Інфекційна безпека.

Мета:

Мікроскопічний метод  застосовують для виявлення збудників  під мікроскопом у препаратах, виготовлених із патологічного матеріалу. Дослідження мікроорганізмів у пофарбованому препараті дає змогу визначити морфологію бактерій (їх форму, розміщення, структури клітини, наявність спор, капсул, включень), тинкторіальні властивості.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Застосовують для діагностики  гонореї, сифілісу, туберкульозу, малярії тощо.

ОСНАЩЕННЯ:

- мікроскопи, імерсійна  олія;

- готові препарати;

- дезінфікуючий розчин;

- 70% етиловий спирт;

- м’яка тканина, вата, марлеві серветки;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Підготуйте мікроскоп до роботи.

3. Поставте мікроскоп у зручну для роботи позицію, підніміть тубус.

4. Протріть оптичну систему.

5. Підніміть конденсор.

6. Встановіть об’єктив х8.

7. Освітіть поле зору за допомогою дзеркала.

Мікроскоп це - чутливий точний оптичний прилад. Він потребує обережного ставлення і чіткого виконання правил під час роботи з ним. Переносячи мікроскоп його слід тримати двома руками - однією за тубусотримач, другу підставити під основу. Забруднені оптичні частини мікроскопа слід протирати м’якою тканиною, змоченою спиртом.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Нанесіть краплю імерсійної олії на препарат.

2. Покладіть препарат на предметний столик.

3. Переведіть об’єктив з малого збільшення на х90 МІ.

4. Опустіть обережно об’єктив макрогвинтами у краплю імерсійної олії (дивитися збоку)

5. Дивлячись в окуляр, повільно піднімайте об’єктив за допомогою макрогвинтів, доки не з’явиться зображення.

6. Встановіть чіткість зображення за допомогою мікрогвинта.

7. Визначте морфологію мікроорганізмів та їх тинкторіальні властивості.

8. Підніміть тубус макрогвинтами.

В імерсійних системах використовують імерсійну олію (кедрову, персикову).

Об’єктив позначають «МІ» - масляна імерсія.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

9. Зніміть препарат з предметного столика, занурте в дезінфікуючий розчин.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Протріть об’єктив ватною кулькою, змоченою у 96% розчині етилового спирту.

2. Протріть об’єктив марлевою серветкою. Серветку покладіть на предметний столик.

3. Переведіть об’єктив на мале збільшення (х8).

4. Опустіть конденсор, тубус, револьвер з об’єкти-вами над поверхнею марлевої серветки.

5. Накрийте мікроскоп захисним ковпаком і поставте у шафу.

6. Проведіть дезінфекцію робочого місця, рук.

7. Вимийте ретельно руки з милом.

Для знезараження і знежирення.

Захист від пилу.

Забезпечується інфекційна безпека.

Мета:

Посів на поживні середовища проводять для бактеріологічного дослідження з метою виділення чистої культури мікроорганізмів та її ідентифікації.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Для виділення чистої культури мікроорганізмів.

ОСНАЩЕННЯ:

- термостат;

- ДДС, Ендо, ЕМС;

- патологічний матеріал;

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- бактеріальна петля;

- олівець по склу;

- пінцет, вата;

- штатив;

- дезінфікуючий розчин;

- 70% етиловий спирт,  Стерилліум;

- гумові рукавички, мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Підготуйте робоче місце.

3. Переверніть чашку Петрі дном догори, підпишіть номер зразка.

РЕЄСТРАЦІЯ МАТЕРІАЛУ

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Поставте чашку Петрі донизу дном, зліва від спиртівки.

2. Запаліть спиртівку.

3. Зафламбуйте бактеріологічну петлю, візьміть патологічний матеріал із пробірки.

4. Підніміть правою рукою кришку чашки Петрі так, щоб в щілину між кришкою та її дном пройшла бактеріологічна петля.

5. Втирайте патологічний матеріал бактеріологічною петлею в поверхню поживного середовища біля (чашки) - краю чашки, далі штрихи наносять через всю поверхню середовища від однієї стінки чашки до другої (протилежної) і розташовують їх якомога ближче один від одного, не відриваючи петлі від середовища, продовжить робити посів штрихами по всій поверхні чашки.

6. Закрийте чашку Петрі.

7. Зафламбуйте бактеріологічну петлю, поставте її в штатив.

8. Закрийте спиртівку.

Матеріал для посіву в кільці бактеріологічної петлі утворює 
плівку-«дзеркальце».

Мета посіву – отримати ізольовані колонії.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Поставте у термостат чашки Петрі на 18-24 години при Т – 37⁰С.

2. Проведіть дезінфекцію рук, робочого місця.

Чашки Петрі обов’язково ставлять догори дном, це забезпечує добру аерацію чашок і запобігає попадання конденсату з кришки чашки Петрі на посів.

Забезпечується інфекційна безпека.