Алгоритми виконання практичних навичок з навчальної дисципліни «Мікробіології»

Мета:

Посів на поживні середовища проводять для бактеріологічного дослідження з метою виділення чистої культури мікроорганізмів та її ідентифікації.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Для виділення чистої культури мікроорганізмів.

ОСНАЩЕННЯ:

- термостат;

- щільні поживні середовища;

- пробірка з патологічним  матеріалом;

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- бактеріологічна петля;

- шпателі;

- штатив;

- олівець по склу;

- дезінфікуючий розчин;

- вата, пінцет;

- 70% етиловий спирт;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2.. Підготуйте робоче місце

3. Підпишіть чашку Петрі з поживним середовищем.

РЕЄСТРАЦІЯ МАТЕРІАЛУ

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Запаліть спиртівку.

2. Зафламбуйте бактеріологічну петлю.

3. Візьміть патологічний матеріал для посіву із пробірки.

4. Нанесіть на поверхню середовища одну краплю патологічного матеріалу на сегмент 1х2.

5. Візьміть у праву рук шпатель (тримайте його як олівець), зніміть з нього папірець.

6. Швидко зафламбуйте шпатель.

7. Покладіть його на нанесену краплю патологічного матеріалу на поверхні поживного середовища.

8. Зробіть посів шпателем – робіть шпателем колові рухи правою рукою, прокручуйте чашку Петрі лівою рукою.

9. Закрийте чашку Петрі, поставте її догори дном.

10. Опустіть шпатель в дезінфекційний розчин.

Матеріал для посіву в кільці бактеріальної петлі утворює плівку-«дзеркальце».

Забезпечується стерильність.

Під час посіву патологічного матеріалу дотримуйтесь правил асептики і техніки безпеки.

Для знезараження.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Поставте у термостат чашки Петрі на 18-24 години при Т – 37⁰С

2. Проведіть дезінфекцію рук, робочого місця.

Для культивування мікроорганізмів.

Чашки Петрі обов’язково  ставлять до гори дном, не більш ніж  по 5 штук. Це забезпечує добру аерацію чашок.

Забезпечується інфекційна безпека.

Мета:

Посів на поживні середовища проводять для бактеріологічного дослідження з метою виділення чистої культури мікроорганізмів та її ідентифікації.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Для виділення чистої культури мікроорганізмів.

ОСНАЩЕННЯ:

- термостат;

- щільні поживні середовища  різного складу і призначення;

- матеріал (на тампоні  слиз із носа)

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- вата, пінцет;

- олівець по склу;

- дезінфікуючий розчин;

- 70% етиловий спирт;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички..

2.. Підготуйте робоче місце

3. Підпишіть чашку Петрі з поживним середовищем, переверніть чашку дном догори, підпишіть номер, дату посіву.

РЕЄСТРАЦІЯ МАТЕРІАЛУ

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Запаліть спиртівку, поставте ліворуч від неї чашку Петрі із середовищем дном до гори.

2. Візьміть тампон у праву руку.

3. Візьміть чашку Петрі із середовищем у ліву руку, піднесіть її до полум’я не далі ніж на 10 см.

4. Зробіть посів тампоном зигзагоподібними штрихами.

5. Закрийте чашку Петрі.

6. Закрийте спиртівку.

7. Опустіть тампон у пробірку.

Під час посіву патологічного  матеріалу дотримуйтесь правил асептики і техніки безпеки.

При посіві тампоном обережно втирають матеріал, обертаючи тампон.

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Поставте у термостат чашки Петрі на 18-24 години при Т – 37⁰С.

2. Проведи дезінфекцію рук, робочого місця.

Для культивування мікроорганізмів.

Чашки Петрі обов’язково ставлять догори дном, що забезпечує добру аерацію чашок.

Знижується ризик інфікування.

Мета:

Визначати культуральні властивості мікроорганізмів.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Характер росту мікроорганізмів на поживних середовищах визначає їх культуральні властивості. Ці властивості постійні для кожного виду мікроорганізмів, тому є важливою ознакою під час їх ідентифікації.

На щільних поживних середовищах мікроорганізми утворюють колонії, які характеризуються за розміром, формою, контуром краю, прозорістю, рельєфом, характером поверхні, кольором, структурою, консистенцією.

У рідких поживних середовищах  мікроорганізми можуть утворювати помутніння, осад, плівку, пристінковий ріст.

ОСНАЩЕННЯ:

- бінокулярний мікроскоп,

- лупа;

- бактеріальні петлі,

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- дезінфекційний розчин;

- культури мікроорганізмів  на рідких та щільних поживних  середовищах;

- 70% етиловий спирт;

- олівець по склу;

- гумові рукавички,  мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Приготуйте культури мікроорганізмів:

- на рідких живильних  середовищах;

- на щільних живильних  середовищах;

3. Приготуйте оснащення:

- бінокулярний мікроскоп;

- лупу;

- спиртівка, сухий спирт, сірники;

- бактеріальні петлі;

- етиловий спирт;

- олівець по склу

- дезінфекційний розчин.

Для вирощування бактерій в лабораторних умовах викори-стовують, живильні середовища: рідкі, напіврідкі і щільні. Залежно від потреб бактеріологів застосовують в практиці універсальні/прості середовища - МПА, МПБ.

Спеціальні - кров'яний, сиро-ватковий агар.

Елективні - лужний агар, 1% пептонна вода.

ДДС: Ендо, ВСА тощо.

Середовища Гісса.

II. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКА

1. Через лупу або під бінокулярним мікроскопом 
уважно розгляньте ріст мікроорганізмів на щільному живильному середовищі.

На щільних поживних середовищах мікроорганізми утворюють колонії.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

2. Охарактеризуйте колонію за ознаками:

за величиною (діаметром)

- великі (4-6 мм і більше)

- середні (2-4 мм)

- дрібні (1-2 мм)

- карликові або точкові  (менше 1 мм)

за формою

- правильна - кругла

- неправильна – амебоподібна, ризоідна (нагадує переплетене коріння  дерева)

за рельєфом

- плоскі – розстилаються  по поверхні середовища

- каплеподібні

- куполоподібні

- конусоподібні –  у вертикальному розрізі нагадують трикутник

- випуклі з вдавленим  центром

- випуклі з центром  у вигляді сосочка

за контуром краю

- рівний

- нерівний: фестончатий  – утворює великі заокруглені зубці правильної форми; хвилястий – великі заокруглені зубці виражені нечітко; зазубрений - 
зубці гострі, різної величини і форми; бахромчатий – має ніжні ворсинки; розпливчастий – важко відрізнити межу між колонією і поживними середовищем.

поверхня  колонії

- матова або блискуча

- суха або волога

- гладенька або шорстка

колір колонії

- безбарвні

- жовті

- білі

- кремові

- золотисті

- сині

- червоні

- фіолетові

- чорні, тощо

структура колонії

- проведіть дослідження  у прохідному світлі при малому  збільшенні мікроскопа

- гіалінові (без видимої певної структури)

- зернисті (залежно від  розміру зерен можуть бути  дрібно- і грубозернистими)

Характеристика колонії - важливий етап виділення чистої культури мікроорганізмів.

Мікроорганізмам кожного  виду притаманні колонії, які визначають їх культуральні властивості

На щільних поживних середовищах вивчають колонії неозброєним оком, через лупу або під бінокулярним мікроскопом.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

- ниткоподібні

- волокнисті (наявність волокон у середині колонії)

- однорідні (колонія  у всіх її частинах однакова)

консистенція  колонії

1) її визначають за  допомогою стерильної бактеріологічної петлі при доторканні до колонії:

- пастоподібні (нагадує  вершкове масло, легко знімається)

- в'язкі або слизькі  (прилипають і тягнуться за  петлею)

- волокнисті, шкірясті, щільні (знімаються з поверхні поживного середовища у вигляді плівки)

- крихкі, сухі (розсипаються  у разі торкання петлею).

2) бактеріальну петлю  пропаліть у полум'ї пальника по закінченню роботи з культурами мікроорганізмів.

3. Вивчіть характер росту мікроорганізмів на рідких поживних середовищах:

- плівка на поверхні  середовища.

- дифузне помутніння  середовища

- утворення осаду на  дні

- пристінковий ріст

Аеробні бактерії мають  тен-денцію до поверхневого росту.

Такий характер росту спостерігається у більшості факультативно-анаеробних мікроорга-нізмів.

Ріст анаеробних мікроорга-нізмів.

III. ЗАКІНЧЕННЯ  НАВИЧКИ

1. Проведи дезінфекцію робочого місця та рук.

Знижується ризик інфікування  медперсоналу.

Мета:

Визначення точних маркерів мікроорганізмів: антибіотикограми методом паперових дисків.

ПРИЗНАЧЕННЯ:

Для раціональної терапії.

ОСНАЩЕННЯ:

- термостат;

- чиста культура мікроорганізмів;

- фізіологічний розчин;

- піпетки, груші, пробірки;

- живильне середовище;

- диски з антибіотиками;

- спиртівка, сухий  спирт, сірники;

- дезінфікуючий розчин,

- вата, пінцет;

- 70% етиловий спирт,  Стерилліум;

- гумові рукавички, мило, рушник.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

І. ПІДГОТОВЧИЙ  ЕТАП

1. Надягніть гумові рукавички.

2. Приготуйте мікробну завісину: зробіть бактеріальну суспензію з 5-10 колоній у 2 мл фізіологічного розчину.

3. Підпишіть чашку Петрі з поживним середовищем для визначення чутливості мікроорганізмів до антибіотиків.

ІІ. ВИКОНАННЯ  НАВИЧКИ

1. Запаліть спиртівку.

2. Візьміть стерильною піпеткою бактеріальну суспензію (10³-10³ КУО (мл) в об’ємі 1мл і рівномірно розподіліть на поверхні середовища при похитуванні чашки.

3. Надлишок рідини видаліть у дезінфекційний розчин, туди ж занурте і відпрацьовану піпетку.

4. Підсушіть чашку Петрі з живильним середовищем при кімнатній температурі 20-30 хв. (або в термостаті 15-20 хв.) у розкритому вигляді.

5. Розкладіть на поверхню засіяного газону за допомогою стерильного пінцету диски з антибіотиками на відстані 1,5-2 см від країв чашки і один від одного. (Диски злегка притисніть до поверхні середовища.)

6. Поставте у термостат чашки з посівами догори дном на 18-24 години при Т–37⁰С.

Під час посіву патологічного  матеріалу дотримуйтесь правил асептики і техніки безпеки.

ЕТАПИ

ОБГРУНТУВАННЯ

ІІІ. ЗАКІНЧЕННЯ НАВИЧКИ

1. Проведіть облік результатів дослідження у запропонованому досліді. За допомогою металевої лінійки виміряйте зони затримки росту. Порівняйте дані з даними таблиці «Інтерпретація значень діаметрів і зон затримки росту». Зробіть висновок про чутливість даної культури до антибіотиків.

2. Проведіть дезінфекцію рук, робочого місця.

Аналіз антибіотикограми.

Забезпечується інфекційна безпека.