Организация микробиологической и иммунологической лаборатории

Организация микробиологической и иммунологической лаборатории

Лаборатория –  (средневековая лат. laboratorium, от лат. laboro - работаю) это учебное, научное или производственное учреждение или подразделение учреждения, выполняющее экспериментальные, контрольные или аналитические исследования.

У органов здравоохранения  есть:

- клинико-диагностические  лаборатории. Общие и специальные  (биохимические, бактериологические, иммунологические, цитологические  и другие);

- бактериологические;

- санитарно бактериологические;

- санитарно химические;

- центральные (ЦНИЛ). Проблемные, отраслевые, ВУЗов;

- специальные лаборатории  (особо опасные).

Принципы диагностики

Диагностика основана на выявлении МО или его  продуктов жизнедеятельности, его  частей или также ответную реакцию  организма на проникновение выше указанных.

Забор материала. Выбор определяется патогенезом МО. Производится в асептических условиях.

- вид материала определяется  клиникой;

- количество материала  должно быть достаточным;

- материал берут по  возможности на ранних этапах  развития болезни;

- забор материала должен  осуществляться до начала Ab-терапии;

- материал берут в месте  наибольшей концентрации МО;

- при заборе материала должны соблюдаться асептические условия;

- любой материал должен  рассматриваться как опасный;

- хранение и транспортировка  материала должны быть максимально  короткой, асептической и не должно  подвергаться влиянию извне;

- материал должен документироваться.

Микробиологическая  диагностика.

Бактерий:

- микроскопия;

- культуральный метод;

- биологический;

- серологический;

- аллергологический.

Вирусов:

- вирусоскопический;

- Вирусологический;

- серологический.

Грибы:

- микологические исследования;

- Гистологический (обнаружение  спор).

Простейшие:

- микроскопический;

- серологический;

- аллергологический.

Иммунологическая  диагностика

- данные общего обследования;

- оценка факторов неспецифической  резистентности (фагоцитарная активность, НСТ тест, хемилюминесценция, концентрация  комплемента и прочих иммунных  белков);

- оценка гуморального  и клеточного иммунитета;

- Дополнительные тесты.

БАКТЕРИИ

Семейство Micrococcaceae

Род Staphylococcus

Стафилококки — повсеместно распространённые микроорганизмы, вызывающие поражения у человека и животных. Первых представителей рода выделили Пастер и Кох, а из очагов гнойных поражений человека — Розенбах. Род образуют неподвижные кокки диаметром 0,5-1,5 мкм, располагающиеся в мазках одиночно, парами или гроздьями, что обусловлено способностью делиться во взаимно перпендикулярных плоскостях. Стафилококки неподвижны; факультативные анаэробы, хемоорганотрофы с окислительным и ферментативным метаболизмом, каталаза-положительны; содержат цитохромы, но обычно оксидаза-отрицательны, чувствительны к действию лизостафина (но не лизоцима), что обусловлено лабильностью пентаглициновых мостиков, соединяющих мурамовую кислоту и тетрапептиды в пептидог-ликанах клеточной стенки. Растут на средах с 5-10% NaCl; температурный оптимум — 30-37 ^оС. На плотных средах образуют мутные круглые ровные колонии кремового, жёлтого или оранжевого цвета. Цвет колоний обусловлен наличием липохромного пигмента; его образование происходит только в присутствии кислорода и наиболее выражено на средах, содержащих кровь, углеводы или молоко. Вызывают характерное разжижение желатина с образованием воронки, заполненной жидкостью (на 4-5 сут). На жидких средах дают равномерное помутнение, а затем рыхлый осадок, превращающийся в тягучую массу. Восстанавливают нитраты; образуют H₂S; разлагают глюкозу, ксилозу, сахарозу, мальтозу, глицерин, маннит с выделением кислоты; уреаза-положительны; крахмал не гидролизуют; индол не образуют. Видоспецифичными Аг являются тейхоевые кислоты; для S. aitreus - риботейхоевые, для S. epidermidis — глицеринтейхоевые; у S. saprophyticus выявляют оба типа кислот.

Типовой вид  — S. aureus. Стафилококки хорошо переносят высушивание, сохраняя вирулентность; погибают при прямом воздействии солнечного света в течение 10-12 ч. Довольно устойчивы к нагреванию — при 70-80 ^оС погибают за 20-30 мин, при 150 ^оС — за 10 мин; сухой жар убивает их за 2 ч. Менее устойчивы к действию дезинфектантов, но резистентны к воздействию чистого этанола. 14 из 27 известных видов обнаружены на коже и слизистых оболочках человека (S. aureus, S. epidermidis, S. saprophyticus, S. hominis, S. haemolyticits, S. warneri, S. capitis, S. saccharolyticus, S. auricularis, S. simulans, S. cohni, S. xylosus, S. lugdunensis и S. schleiferi); большинство из них лучше растёт в аэробных условиях (исключая S. saccharolyticus. предпочитающего анаэробные условия). По наличию коагулазы все стафилококки разделяют на две группы, среди патогенных видов коагулаза-положителены лишь S. aureus; остальные виды называют коагулаза-отрицательными. Основные поражения человека вызывают S. aureus. S. epidermidis и S. saprophyticus.

Staphylococcus aureus

Эпидемиология. Золотистый стафилококк распространён повсеместно и часто входит в состав нормальной микрофлоры человека (носители), обычно колонизирует носовые ходы, брюшную полость и подмышечные области. В большинстве случаев носительство ограничено несколькими неделями или месяцами; хроническое носительство типично для персонала медицинских учреждений; пациентов, страдающих атопическими дерматитами, а также регулярно использующих инъекции различных препаратов (наркоманы, больные сахарным диабетом, лица с повторными гемодиализами и др.). Подавляющее число инфекций носит эндогенный характер, механизм инфицирования обычно связан с переносом возбудителя из участков колонизации на травматизированную поверхность (например, кожные покровы); существенную роль играют также тесные контакты с носителями и лицами, страдающими стафилококковыми поражениями.

Клинические проявления для КВД. Инфекции, вызываемые S. aureus, разнообразны и включают более 100 нозологических форм. Бактерии способны поражать практически любые ткани организма человека. Наиболее часто наблюдают вариабельные поражения кожи и её придатков — от стафилококкового импетиго (импетиго Бокхарта) до тяжёлых фолликулитов. Также S. aureus является основным возбудителем маститов у женщин и инфекционных осложнений хирургических ран.

Синдром «ошпаренных младенцев» (болезнь Риттера фон Риттерштайна) наблюдают у новорождённых, инфицированных штаммами, продуцирующими эксфолиатины. Заболевание начинается бурно; характерно формирование больших очагов эритемы на коже с последующим образованием (через 2-3 сут) больших пузырей (как при термических ожогах) и обнажением мокнущих эрозированных участков.

Синдром «ошпаренной кожи» (синдром Лайелла) наблюдают у взрослых детей и взрослых; характерны очаги эритемы и пузыри, тяжёлая интоксикация и отхождение субэпидермально-го слоя. При проведении профилактики вторичных инфекций очаги поражений самоограничиваются.

Лабораторная диагностика включает выделение возбудителя из образцов.

Рост. Через 24 ч S. aureus образует гладкие выпуклые мутные колонии обычно желтоватого цвета около 4 мм в диаметре (бактерии вырабатывают жёлтый пигмент, и цвет колоний варьирует от белого до оранжевого); наиболее интенсивно пигмент образуется на агаре, дополненном 10% снятого молока. На кровяном агаре они окружены зоной полного гемолиза. Иногда, особенно на бедных средах, лишённых необходимых ростовых факторов (гемин, тиамин, пантотенат и др.), может формировать карликовые G-колонии (менее 1% изолятов), лишённые зон гемолиза и часто растущие в виде сателлитных колоний вокруг других бактерий в смешанных культурах. Также следует помнить о способности стафилококков образовывать полиморфные L-формы; для возврата к исходными формам проводят посев на тиогликолевую среду. Хорошо растут на бульоне, образуя сначала равномерное помутнение, а затем рыхлый хлопьевидный осадок. Дают весьма характерный рост на желатине: через 24-28 ч (наряду с обильным ростом по уколу) можно наблюдать начальное разжижение среды, а на 4-5 сут образуется направленная вниз воронка, наполненная жидкостью.

Дифференцировка. Применяют коагулазный тест на наличие свёртывающего фактора, положительный для 95% изолятов (желательно исследовать наличие свободного и связанного с клетками фермента), а также определяют способность ферментировать маннит (разлагают); исследуют способность синтезировать термостабильную ДНК-азу и агглютинировать частицы латекса или сенсибилизированные эритроциты барана. Последний тест позволяет выявлять белок-А и свёртывающий фактор либо оба продукта. Следует помнить о возможных ложноположительных результатах при наличии S. epidermidis и микрококков, а также ложноотрицательных, обычных для метициллин (оксациллин) резистентных штаммов S. aureus (MRSA). В редких случаях инфекций, вызванных S. intermedius (обычно после укусов собак), также выделяют коагулаза-положительные стафилококки, отличающиеся от S. aureus способностью синтезировать пироглютамил-3-нафтиламидаминопептидазу.

Серологические исследования (например, идентификация AT к тейхоевым кислотам) не имеют принципиального значения, а результаты часто носят противоречивый характер. До настоящего времени реагенты для идентификации TSST-1 и AT к нему остаются недоступными.

Идентификация с помощью типовых  бактериофагов. Метод типирования патогенных стафилококков бактериофагами достаточно широко применяют в клинической эпидемиологии. Для фаготипирования используют стандартный набор из 20 бактериофагов, разделённых на 4 группы: 1-я группа включает фаги 29, 52, 52А,79, 80, 2-я — ЗА, ЗС, 55, 71, 3-я — 6, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А, 84, 85, 4-я — 42D. С помощью соответствующих бактериофагов удаётся типировать 60-80% изолятов; установлены особые эпидемические штаммы (например, фаготипов 80 и 77), наиболее часто выделяемые при внутрибольничных вспышках.

S. epidermidis

Наиболее часто колонизирует гладкую кожу и поверхность слизистых оболочек; микроорганизм характеризуется слабой вирулентностью, подавляющее большинство инфекций носит нозокомиальный характер, их чаще наблюдают у пациентов с пониженной резистентностью. Типичными для эпидермального стафилококка считают поражения, обусловленные инфицированием различных устройств (протезов, катетеров, дренажей) либо гематогенным диссеминированием возбудителя после хирургических вмешательств. Достаточно часто микроорганизм вызывает поражения мочевыводящей системы (особенно у лиц старше 50 лет с различными формами уропатологии в анамнезе) и суставные инфекции, чаще развивающиеся не позднее 1 года после имплантации протеза (50% всех случаев).

Микроорганизм не проявляет гемолитическую активность и на кровяном агаре образует беловатые  гладкие выпуклые колонии. Основным методом дифференцировки от S. aureus считают определение коагулазной активности.

Выделенный  коагулаза-отрицательный стафилококк  следует дифференцировать от микрококков, чаще образующих жёлтые негемолизирующие колонии, и от прочих стафилококков, выделяемых из мочи (например, S. saprophyticus, S. cohni, S. lenthus, S. sciuri и S. xylosus), по нечувствительности к новобиоцину, к которому S. epidermidis чувствителен.

S. saprophyticus

 Колонизирует кожные покровы гениталий и слизистую оболочку уретры; прикреплению и росту на эпителии мочевыводящих путей способствуют олигосахаридные поверхностные рецепторы, а также способность к выделению ферментативного комплекса, подавляющего рост прочих бактерий. Наиболее часто микроорганизм вызывает циститы и дизуричес-кие расстройства у женщин, ведущих активную половую жизнь; реже наблюдают пиелонефриты и эндокардиты. Выделение проводят по стандартной схеме, идентификацию — по чувствительности к новобиоцину, бацитрацину (чувствителен) и некоторым особенностям физиологии и метаболизма.

Семейство Streptococcaceae

Род Streptococcus

Эти стрептококки впервые обнаружены в тканях человека при рожистом воспалении и раневых инфекциях (Бильрот, 1874), септицемиях и гнойных поражениях (Пастер, 1879; Огстон, 1881); в чистой культуре их выделили Феляйзен (1883) и Розенбах (1884). Род образуют сферические или овоидные клетки размером 0,5-2,0 мкм; в мазках располагаются парами или короткими цепочками (особенно при выращивании на жидких средах); под различными воздействиями могут приобретать вытянутую или ланцетовидную форму, напоминая коккобациллы. Неподвижны, спор не образуют; некоторые виды имеют капсулу. Хемоорганотрофы; метаболизм бродильный; виды, имеющие медицинское значение, ферментируют глюкозу с образованием молочной кислоты. Каталаза-отрицательны; большинство видов проявляет гемолитическую активность. Факультативные анаэробы; предпочтительно содержание 5% С0₂; некоторые - микроаэрофилы, предпочитают анаэробные условия. Растут в интервале 25-45 °С; температурный оптимум 37 ^оС. Способны образовывать L-формы. Паразиты млекопитающих;

 типовой вид - S. pyogenes. По предложению Ребекки Лэнсфилд (1933) стрептококки классифицируют по наличию специфических углеводов в клеточной стенке; выделяют 17 серогрупп, обозначаемых заглавными латинскими буквами (по специфичности белковых Аг М, Р, и Т стрептококки внутри групп разделяют на серовары). Также используют классификацию Брауна (1919), основанную на особенностях роста на агаре с кровью барана. Соответственно выделяют α- (дают частичный гемолиз и позеленение среды), β- (полностью гемолизирующие) и γ- (дающие визуально невидимый гемолиз) стрептококки; основными возбудителями болезней человека являются (β-гемолитические виды, большая часть которых относится к серогруппе А. Большинство изолятов серогруппы принадлежит к виду S. pyogenes, оба термина рассматривают как синонимы. Микроорганизмы известны с глубокой древности. Широко распространялись инфекции кожи и мягких тканей — от стрептококкового импетиго до рожи, часто заканчивавшейся фатально. Последняя была неизбежным спутником войн и, по словам американского историка Д. Макферсона, «косила северян и южан» во время Гражданской войны. Следует отметить, что стрептококковые поражения дают подъём заболеваемости и в настоящее время даже во вполне благополучных странах, например, эпидемическая вспышка в Солт-Лейк-Сити (Юта, США) в 1985 г. Однако совершенствование терапевтических мероприятий резко снизило их тяжесть. Тем не менее, зарегистрированы относительно новые формы поражений, например стрептококковый токсический синдром, напоминающий аналогичное поражение, вызываемое стафилококками.

Клинические проявления для КВД. Основные проявления кожных инфекций, вызванных стрептококками группы А, составляют целлюлиты, рожистые воспаления и пиодермии-импетиго (импетиго Фокса). В мягких тканях они вызывают некротизирующие фасцйты и гангренозные поражения (редко); чаще они развиваются на месте предшествующей травмы и без адекватного лечения могут привести к фатальному исходу. Инкубационный период рожистого воспаления варьирует от нескольких часов до 5-6 сут. Характерно острое начало с озноба, общей слабости, головной боли, повышения температуры тела до 39-40 ^оС. В первые сутки появляются отёки, гиперемия и болезненность поражённого участка кожи.

  Лёгкие  формы проявляются кратковременной  (до 3 сут) и относительно умеренной  лихорадкой, интоксикацией и эритематозным  поражением кожи одной области.

При среднетяжёлой  форме лихорадка продолжается до 4-5 сут, поражения кожи носят эритематозно-буллёзный или эритематозно-геморрагический характер.

  Тяжёлые  поражения отличают выраженная  интоксикация с нарушением психического  статуса, эритематозно-буллёзными, буллёзно-геморрагическими поражениями  обширных участков кожи с частыми гнойно-септическими осложнениями (абсцессы, гангрена, сепсис, инфекционно-токсический шок).